Гдз по биологии 5: ГДЗ по биологии за 5 класс, решебник и ответы онлайн

Содержание

ГДЗ по биологии 5 класс Сивоглазов, Плешаков Решебник

Авторы: Сивоглазов В.И., Плешаков А.А.

Издательство: Просвещение 2019

Тип книги: Учебник

Рекомендуем посмотреть

Биология – сложный и трудный предмет для понимания. К сожалению, он вызывает множество проблем у учащихся во время его изучения. Из-за этого у детей начинаются проблемы в учебе: недопонимание с учителем, пробелы в биологической науке, а также возрастают споры со смежными дисциплинами. И как распутаться во всей этой неразберихе? Что делать пятикласснику, если он проседает в этой точке? Конечно же, обратиться за подмогой к нашему решебнику по биологии за 5 класс Сивоглазова. Именно это подспорье вмиг решит все серьезные и несерьезные проблемы, облегчит восприятие и откроет глаза обучающегося на элементарные вещи. Да, мы окажем помощь вашему малышу, если он не может разобраться в какой-то теме, вызывающей затруднения при разборе.

Какие полезные свойства приобретет ребенок от ГДЗ по биологии за 5 класс Сивоглазова

Если ваш ребенок будет хотя бы иногда пользоваться нашим пособием, то он исключит проблематику в такой научной сфере, как биология. Она перестанет быть ему неприятной. Наоборот, студент полюбит этот урок, попробует разобраться в нем, освоит начало этой природоведческой науки.

  1. Сформирует систему биологических познаний как компонента целостной научно-популярной карты окружающего мира.
  2. Овладеет умениями формулировать гипотезы и теории, экспериментировать и анализировать полученные результаты.
  3. Сможет овладеть научным подходом к решению различных уравнений.
  4. Продолжит формирование ЗУНов безопасного и результативного применения оборудования.
  5. Воспитает ответственное и бережное отношение к природе и окружающему миру.
  6. Осознает значимость концепции устойчивого мира.
  7. Научится сопоставлять теоретические и практические знания с объективными жизненными реалиями.

Всегда обращайтесь к онлайн-ГДЗ по биологии 5 класс авторов: Сивоглазов, В. И., Плешаков, А. А. Именно это подспорье поможет достичь вам определенных устойчивых результатов в столь сложной многофункциональной науке. Применяя наше пособие, у вас не будет возникать никаких вопросов, вы с легкостью выполните все упражнения и проверочные точки.

Родители и преподаватели всегда будут вас хвалить и ставить в пример как прилежного понимающего все ученика.

Быстрый поиск

Итак, мы пришли к выводу о том, что биология является ключевой дисциплиной при прохождении школьной программы. И ее изучение просто необходимо для качественного образования. И, чтобы вам было легче учиться в школе, мы предложили обратиться к нашему учебно-методическому комплексу, который за короткие сроки решит все возникшие проблемы.

Компетенции, которые сможет получить ребенок, если будет использовать онлайн-ГДЗ по биологии за 5 класс Сивоглазова

Вот, чему научится пятиклассник, который прибегает к помощи нашего онлайн-подспорья:

  • анализирует и проводит оценку воздействию факторов живого и неживого мира;
  • сравнивает биологические объекты и приходит к определенным выводам;
  • вычисляет влияние человеческого воздействия на организмы и экосистемы;
  • определяет принадлежность объектов биологии к какой-то классификации;
  • определяет приспособление организмов к среде существования.

Этому и еще много научат наши специалисты вашего школьника, если вы станете присматриваться к нашему порталу.

Почему выбирают онлайн-ГДЗ по биологии 5 класс авторов: Сивоглазов, В. И., Плешаков, А. А.

Вот по каким причинам мамы и папы, учителя и обучающиеся обращаются именно к нашему пособию:

  • вся информация находится в открытом доступе и не имеет ограничений для использования;
  • тексты написаны простым языком и не сопровождаются сложной терминологией, которая является для многих непонятной;
  • каждое упражнение прокомментировано для четкого и грамотного объяснения;
  • для того чтобы воспользоваться сайтом достаточно иметь подключение к интернету;
  • комплекс помогает при подготовке д/з, решения контрольных и проверочных работ, тестов;
  • его можно применять для подготовки к участию в олимпиадах, выступлений с докладами, а также для сдачи экзаменов.

Все, кто хоть раз открывал наш интернет-портал, остались довольны. Ведь знания улучшились и укрепились, оценки в журнале стали положительными, педагоги и родители довольны результатами. Мы ответственно подходим к тому материалу, который предоставляем вам. Он проходит отбор, проверку на наличие ошибок и опечаток, а также на соответствие стандартов ФГОС. Для нас важно дать качественное обучение малышу и не допустить пробелов в полученных знаниях. Наш решебник не просто дает правильные и готовые варианты ответов. И это не для того чтобы учащиеся списывали и облегчили себе задачи. Это нужно для того чтобы обучающийся понимал суть решения, глубже изучал предмет и всегда смог аргументировать свой ответ на любой вопрос от преподавателя. Поэтому вы можете в любой момент воспользоваться нашим приложением, которое сделает из вас отличника.

ГДЗ по биологии 5‐6 класс Пасечник, Суматохин Решебник

Увлекательный в то же время очень познавательный, интригующий предмет, предложит своим юным первооткрывателям, окунуться в невероятный мир, который окружает каждого жителя планеты Земля.

Дамы и господа встречаем фантастический учебник по биологии 5-6 класс авторов; Пасечник В. В., Суматохин С.В., Калинова Г.С., Гапонюк З.Г. УМК «Линия жизни» Замечательное учебное издание, составленное настоящими профессионалами, подарит непередаваемые эмоции и бурю жарких дискуссий, которые захватят абсолютно каждого. Помимо разнообразных вариаций информационного материала, расположенного на страницах чудесной книги. Ребята столкнуться с очень непростыми упражнениями, которые потребуют от ученика собрать волю в кулак. Но можно этого не делать и просто воспользоваться готовыми домашними заданиями. Тем более это универсальное творческое издание находится в общедоступном месте, буквально двадцать четыре часа в сутки.

Учебник продемонстрирует ученикам многое, но начинать нужно с предисловия. На какие вопросы отвечает предмет, и что исследует. Какие лабораторные анализы способны удивить, почему человечество целиком и полностью зависит от всех видов организмов, которые живут рядом с нами.

Книга разделена на пять серьезных частей. Все главы разбиты темами, на освоение которых понадобиться довольно много времени и усидчивости. На этом непростом, важном этапе, стоит забыть про повседневные развлечения и всецело отдаться научному прогрессу. Ребятам предстоит проанализировать жизнедеятельность самых маленьких организмов, ведь они служат основополагающим всего. Проникнуть в их среду обитания и познакомиться с удивительными феноменами близко, задача, которая стоит на первом месте.

ГДЗ создано исключительно для всех, чья жизнь связана с учебными процессами. Легкий, интуитивный поиск, позволит быстро найти нужные

ответы, на важные педагогические вопросы. Теперь работая с Д/З, онлайн решебник во время подскажет верное пошаговое решение, и проблемы с уроками больше не будут наблюдаться. Списывать, конечно, учителя не советуют, а вот корректировать собственные действия в тетради, при помощи шпаргалки, пожалуйста. ГДЗ подойдет не только учащимся разных классов, но и студентам, которые пытаются подготовиться к сессиям. Однозначно, если ищешь хорошие варианты по получению отличных оценок, то не тормози, используй пособие прямо сейчас.

ГДЗ по биологии 5 класс ответы и решения онлайн к учебникам и рабочим тетрадям

Постоянно и системно работая с решебниками, школьники уже с самого начала средней ступени школы учатся ответственности за свой труд и его результаты. Они последовательно и эффективно овладевают навыками:

  • работы с информацией — её подбором, анализом, оценкой и предпочтением того или иного варианта решения, обобщением и формулировкой выводов;
  • понимания логики верного решения, алгоритма получения грамотного ответа;
  • верного оформления работы. Представленные в решебнике ответы полностью соответствуют существующим регламентам отражения результатов, их последним изменениям. Это важно как для тех, кто планирует участвовать в олимпиадах и конкурсах по дисциплине. Поскольку неграмотно записанный ответ может стоить победы, призового места. Для всех остальных принцип верной записи также немаловажен, так как на диагностических, ВПР, контрольных по предмету.

Основы эффективной самоподготовки

Для того, чтобы работа с учебными материалами и гдз по биологии за 5 класс к ним была максимально результативной, важно соблюдать некоторые правила подготовительных занятий:

  • уделять достаточное количество времени на них. Оптимальными, по мнению ряда экспертов и специалистов, считаются ежедневные часовые занятия. Однако, если организовать такой режим не представляется возможным, рекомендуется воспользоваться альтернативным — еженедельной работой, не реже двух-трех раз в неделю по полтора-два часа;
  • отсутствие длительных перерывов в занятиях. Пропуски отрицательно сказываются на качестве подготовки. Материал, пройденный большими блоками, усваивается гораздо хуже, к тому же он плохо запоминается и быстро забывается пятиклассниками;
  • регулярно контролировать свои результаты. Если они окажутся ниже тех, что запланированы, стоит перейти на другую программу, УМК по дисциплине или составить иной, более эффективный, план подготовки.

Аргументы в пользу применения онлайн справочников

Некоторые педагоги выступают против использования пятиклассниками онлайн сборников по биологии за 5 класс, аргументируя свою позицию такими доводами:

  1. Пользуясь такими пособиями, школьники не пытаются мыслить самостоятельно, думать и находить собственные ответы.
  2. Иногда нетривиальное, даже парадоксальное решение, ответ, данный учеником, оказывается не просто верным, а более обоснованным и грамотным, чем традиционно принятый. А материалы решебника лишают самого ученика и общество в целом возможности получить открытие или новое направление мысли в науке.
  3. Списывание негативно сказывается на взаимоотношениях с учителями, последние теряют авторитет в глазах учеников, поскольку знания обесцениваются.

На самом деле, почти все из приведенного выше верно лишь отчасти. Умение работать с информацией можно приобрести, и используя онлайн ответы по биологии 5 класс, главное — как именно их использовать. Сенсации и открытия в науке, сделанные школьниками, хоть и встречаются, но большая редкость. И, вероятнее всего, решебник не помешает им свершиться. Учительский авторитет не пошатнется, если педагог трудится честно и ответственно, а не пользуется сам сборником ответов для извлечения правильного решения, запрещая делать то же самое своим ученикам.

Кроме того, коллеги педагогов-предметников, выступающие за пользование решебниками, приводят такие аргументы в их пользу:

  1. Не всем пятиклассникам в будущем понадобится эта наука. Многие уже спланировали свое будущее, и биология не входит в число дисциплин, которые лягут в основу их дальнейшей трудовой деятельности. Но для поступления в колледжи и техникумы необходим аттестат с высокими оценками по всем предметам, так как, согласно существующим правилам, прием в эти учебные заведения проводится на основе конкурса аттестатов. И регулярно применяя гдз по биологии 5 класс, эти ребята получат нужные им оценки. А освободившееся время потратят на те науки, которые им будут важны впоследствии и интересны сейчас.
  2. Даже переписывание ответа из решебника полезнее, чем списывание решения задачи перед уроком у одноклассника. Хотя бы потому, что дома больше времени на то, чтобы не просто переписать результат, а вникнуть, разобраться в самой технологии, порядке его получения.
  3. Далеко не все пятиклассники просто переписывают ответ из сборника. Достаточно высок процент и тех, кто работает по ним по определенной схеме для наработки нужных навыков, получения глубоких знаний. Особенно важен такой подход для тех ребят, которые не имеют возможности посещать специализированные биологические кружки, курсы, медицинские классы с углубленным изучением дисциплины. Но они желают участвовать в предметных конкурсах и олимпиадах наравне с теми, у кого такая возможность есть. Применение решебников помогает уравнять шансы на успех, главное — регулярность, трудолюбие и нацеленность на результат.

Схема эффективной работы с гдз по биологии в 5 классе для школьников

Хороший результат за короткий период времени дает подготовка по следующему плану:

  1. Повторение пройденного в классе или изучение темы, раздела, блока параграфов из теоретического учебника по предмету.
  2. Выполнение практического задания самостоятельно, используя полученные в ходе выполнения пункта 1 знания теории по заданиям в учебнике, практикуме или заданных учителем.
  3. Сверка полученных самостоятельно результатов с данными в гдз по биологии 5 класс эталонными решениями.
  4. При выявлении расхождений — анализ причин, по которым это могло произойти, поиск и выявление факторов, повлиявших на такое положение дел, устранение проблем и исправление ошибок.
  5. Выполнение аналогичного варианта по той же теме, предложенного в этом же или ином учебнике, практикуме по этой же программе, УМК по дисциплине или по другой, отличной от той, по которой она изучается в школе.
  6. Проверка правильности решения по сборнику-решебнику.
  7. Повторение пунктов 5-6 до тех пор, пока ошибки не перестанут фиксироваться. В этом случае можно сделать вывод о том, что тема усвоена глубоко и полностью и перейти к изучению следующего по программе материала.

Если дать самостоятельный ответ пятиклассник затрудняется, следует применять решебник как базу для изучения практической части задания. Но и в этом случае не надо пренебрегать использованием пунктов 5-7 данной выше схемы для того, чтобы максимально качественно проработать и понять материал.

Кто активно применяет онлайн помощники в процессе обучения?

Хотя бы раз сборниками ответов воспользовался каждый школьник, однако существуют группы пользователей, которые применяют такие ресурсы регулярно или на постоянной основе. В их числе:

  • находящиеся на домашней или семейной формах обучения пятиклассники. Они не имеют возможности постоянно получать объяснения учителя, в том числе — по практическому использованию материала. И онлайн ответы по биологии для 5 класса для них становятся той базой, на основе которой они разбираются в практике дисциплины;
  • часто отсутствующие в школе дети. Например, по причине заболевания или профессиональных занятий творчеством и спортом. Длительное лечение, реабилитация, спортивные сборы, конкурсы приводят к непосещению занятий в школе. В итоге — подросткам приходится разбирать материал самостоятельно, и решебники становятся для них реальными помощниками в этой ситуации;
  • репетиторы, которые не являются экспертами ОГЭ и ЕГЭ, школьными преподавателями. Не знакомые с практическими основами использования образовательных Стандартов, они отслеживают по сборникам ответов технику грамотного оформления ученических работ и систему преподавания предмета в целом. Это позволяет их ученикам получать более точные ответы и не совершать ошибки, например, при записывании решений.

Нередко в число пользователей включаются и сами педагоги-предметники, например, когда нужно быстро проверить большое количество ученических работ. Или родители пятиклассников, чтобы понять, успевает ли их ребенок, верно ли выполняет домашнюю работу, готов ли к контрольной, диагностической, ВПР.

ГДЗ рабочая тетрадь биология 5 класс Сонин, Плешаков

ГДЗ к рабочей тетради для учащихся 5 класса авторов Плешаков А.А., Сонин Н.И. Дрофа – лучший боекомплект, с помощью которого знания у пятиклассников надежно закрепятся.

Очень важно, чтобы ребенок был уверен в том, что в решебнике все задания выполнены правильно. Использовать ГДЗ по биологии нужно в крайнем случае, когда с возникшими затруднениями не могут справиться ни мама, ни папа.

От этого зависит результат успеваемости в школе.

Номера:

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960616263646566676869707172737475767778798081828384858687888990919293949596979899100101102103104105106107108109110111112113114115116117118119120121122123124125126127128129130131132133134135136137138139140141142143144145146147148149150151152153154155156157158159160161162163164165166167168169170171172173174175176177178179180181182183184185186187188189190191192193194195196197198199200201202203204205206207208209210211212213214215216217218219220221222223224225son5bio

Лабораторные работы:

Лабораторные работы. Страница 14-16Лабораторные работы. Страница 19-20

Тренировочные задания:

Тренировочные задания. Страница 26-27Тренировочные задания. Страница 70-71Тренировочные задания. Страница 87-88Тренировочные задания. Страница 102-103

Оглавление:

Часть 1. Живой организм: строение и изучение
§1. Что такое живой организм стр. 5-7
§2. Наука о живой природе стр. 8-9
§3. Методы изучения природы стр. 10-12
§4. Увеличительные приборы стр. 12-14
Лабораторная работа на тему «Устройство увеличительных приборов и правила работы с ними» стр. 14-16
§5. Живые клетки стр. 16-18
§6. Химический состав клетки стр. 20-21
§7*. Вещества и явления в окружающем мире стр. 22-24
§8. Великие естествоипытатели стр. 24-25
Тренировочные задания стр. 26-27
Часть 2. Многообразие живых организмов
§9. Как развивалась жизнь на Земле стр. 28-31
§10. Разнообразие живого стр. 31-33
§11. Бактерии стр. 33-36
§12. Грибы стр. 36-40
§13. Растения. Водоросли стр. 40-42
§14. Мхи стр. 43-44
§15. Папоротники стр. 45-47
§16. Голосеменные растения стр. 47-50
§17. Покрытосеменные (цветковые) растения стр. 50-53
§18. Значение растений в природе и жизни человека стр. 54-58
§19. Простейшие стр. 58-60
§20 Беспозвоночные стр. 60-62
§21. Позвоночные животные стр. 63-67
§22. Значение животных в природе и жизни человека стр. 67-69
Тренировочные задания стр. 70-71
Часть 3. Среда обитания живых организмов
§23. Три среды обитания стр. 72-75
§24. Жизнь на разных материках стр. 76-79
§25. Природные зоны Земли стр. 79-84
§26. Жизнь в морях и океанах стр. 84-86
Тренировочные задания стр. 87-88
Часть 4. Человек на Земле
§27. Как человек появился на Земле стр. 89-92
§28. Как человек изменил Землю стр. 92-94
§29. Жизнь под угрозой стр. 94-96
§30. Не станет ли Земля пустыней? стр. 97
§31. Здоровье человека и безопасность жизни стр. 98-101
Тренировочные задания стр. 102-103

Решебники ГДЗ по Биологии 5 класс

ГДЗ биология 5 класс — учеба может быть легкой!

В пятом классе начинается изучение биологии. Эта наука не появляется на пустом месте, как, например, химия и физика. В младших классах также изучалась природа, но учить биологию от этого не легче. Информации больше, она сложнее усваивается. А если учесть, что новых предметов у пятиклассника добавилось немало, ему обязательно пригодится ГДЗ биология 5 класс.

Готовые домашние задания (ГДЗ) — это сборник ответов на вопросы, а также готовые решения тестов и задач по школьной программе. Берутся школьные учебники, специалисты решают тесты с учетом изложенных в них данных, и так появляется тот или иной решебник биология 5 класс.

Его можно использовать для повышения своего уровня знаний, стараясь решить задачи по уже пройденному материалу. Говорят, повторение — это мать учения. И такой подход действительно работает. Его можно использовать, чтобы освежить память перед экзаменами, контрольными, ЕГЭ.

Зачем школьнику ГДЗ

Ответ на этот вопрос дать очень просто. Помимо хороших оценок и всегда выполненного домашнего задания, с помощью ГДЗ биология 5 класс для учащегося вся, как на ладони:

  • Можно вспомнить, что учили пару недель назад, особенно, когда новая тема автоматически связана и проистекает из предыдущей.
  • Если заболел и пропустил пару уроков, с помощью ГДЗ и решебника легче вникнуть в новый материал самостоятельно.
  • Всегда можно поставить себе вызов и решить задание с повышенным уровнем сложности.

Итогом всего этого становится не просто хорошая оценка, а собственноручно приобретенные знания, а также чувство внутреннего удовлетворения, когда задание сделано правильно!

Зачем родителям ГДЗ

В пятом классе школьник еще недостаточно зрелый, чтобы самостоятельно учиться, хорошо усваивать знания, отвечать за свои поступки. Нужен контроль, в том числе, и над тем, как решаются домашние задания.

Но вот беда — родители учились добрый десяток лет назад, и с тех пор в науке накоплено немало открытий и фактов. К тому же, у многих просто нет желания вникать в учебный процесс досконально.

Нужен удобный инструмент контроля, который сбережет нервы и сэкономит время. И тут на помощь приходит ГДЗ биология 5 класс. Используя его, а также решебник, можно без труда проверять качество выполнения домашних заданий и знания ребенка. Это лайфхак, которым пользуется большинство родителей.

Где смотреть ответы на домашние задания

Найти материалы по биологии и другим наукам можно на сайте GDZDO. Портал собрал самые популярные решебники и ГДЗ, в том числе, и для пятиклассников.

Все задания решены профессионалами. Ответы исчерпывающие, решения с полной выкладкой. Доступ бесплатный нелимитированный — со смартфона, планшета, ПК, так что накопленные знания всегда у вас под рукой.

Достаточно зайти на сайт, выбрать учебник, номер задания и получить подробный отчет о том, что должно быть в ответе школьника, или как решить поставленную задачу. Благодаря этому можно делать домашнее задание намного быстрей.

Заходите на портал GDZDO и смотрите, как решать то или иное задание, чтобы учиться легче и лучше!

учебники, ГДЗ, учебные пособия, справочная литература

Биология 5 класс: учебники, ГДЗ, учебные пособия, справочная литература учебникитесты и ГИАдля учителя
  • Биология, 5 класс, Ловягин С.Н., Вахрушев А.А., Раутиан А.С., 2015
  • Биология, 5 класс, Плешаков А.А., Сонин Н.И., 2012
  • Биология, 5 класс, Пономарева И.Н., Николаев И.В., Корнилова О.А., 2012
  • Биология, 5 класс, Сухова Т.С., Строганов В.И., 2015
  • Биология, 5-6 класс, Живой организм, Сухорукова Л.Н., Кучменко В.С., 2013
  • Биология, 5-6 класс, Пасечник В.В., Суматохин С.В., 2012
  • Биология, 5-6 класс, Пасечник В.В., Суматохин С.В., Калинова Г.С., Гапонюк 3.Г., 2014
  • Биология, 5-6 класс, Сухова Т.С., Строганов В.И., 2013
  • Биология, 5-9 класс, Программа, Пономарева И. Н., Кумченко В.С., 2012
  • Биология, Бактерии, грибы, растения, 5 класс, Пасечник В.В., 2012
  • Биология, Введение в биологию, 5 класс, Плешаков А.А., Сонин Н.И., 2013
  • Биология, Живой opганизм, 5-6 класс, Сухорукова Л.Н., Кучменко В.С., Колесникова И.Я., 2014
  • Биология, Живой организм, 5-6 класс, Сухорукова Л.Н., Кучменко В.С., Колесникова И.Я., 2013
  • Биология, Обо всем живом, 5 класс, Ловягин С.Н., Вахрушев А.А., Раутиан А.С., 2013
  • Биология, Растения, Бактерии, Грибы, Лишайники, 5-6 класс, Часть 1, Трайтак Д.И., Трайтак Н.Д., 2013
  • Биология, Растения, Бактерии, Грибы, Лишайники, 5-6 класс, Часть 1, Трайтак Д.И., Трайтак Н.Д., 2013
  • Биология, Растения, Бактерии, Грибы, Лишайники, 5-6 класс, Часть 1, Трайтак Д.И., Трайтак Н.Д., 2013
  • Биология, растения, бактерии, грибы, лишайники, 5-6 классы, учебник для общеобразовательных учреждений в 2 частях часть 1, Трайтак Д.И., Трайтак Н.Д., 2013
  • Ботаника — Учебник для 5-6 классов — Корчагина В. А.
  • Введение в биологию, Неживые тела, Организмы, 5-6 класс, Никишов А.И., 2012
  • Введение в биологию, Неживые тела, Организмы, 5-6 класс, Никишов, 2012
  • Природоведение, 5 класс, Земля и люди, Еськов К.Ю., Смоктунович Т.Л., 2007
  • Природоведение, 5 класс, Плешаков А.А., Сонин Н.И., 2009
  • Природоведение, 5 класс, Плешаков А.А., Сонин Н.И., 2011
  • Природоведение, 5 класс, Сухова Т.С., Строганов В.И., 2011
  • Природоведение, 5 класс, Сухова, Строганов, 2011
  • Природоведение, Природа, Неживая и живая, 5 класс, Пакулова В.М., 2010
  • Уроки биологии, 5-6 класс, Пасечник В.В., Суматохин С.В., Калинова Г.С., Гапонюк З.Г., 2012
  • Биология, 5 класс, Рабочая тетрадь, Корнилова О.А., Николаев И.В., Симонова Л.В., 2015
  • Биология, 5 класс, Рабочая тетрадь, Пасечник В.В., Суматохин С.В., Калинова Г.С., 2015
  • Биология, Бактерии, Грибы, Растения, 5 класс, Рабочая тетрадь, Пасечник В. В., 2015
  • ВПР 2017, Биология, 5 класс, Диагностическая работа, Описание КИМ
  • ВПР 2017, Биология, 5 класс, Проверочная работа, Образец
  • Природоведение, Природа, Неживая и живая, 5 класс, Рабочая тетрадь, Пакулова В.М., Иванова Н.В., 2012
  • Тесты по биологии, 5 класс, Воронина Г.А., 2013
  • Тесты по биологии, 5 класс, Воронина, 2013

▶▷▶ биология 5 класс рабочая тетрадь сонина и плешакова решебник

▶▷▶ биология 5 класс рабочая тетрадь сонина и плешакова решебник
ИнтерфейсРусский/Английский
Тип лицензияFree
Кол-во просмотров257
Кол-во загрузок132 раз
Обновление:03-11-2018

биология 5 класс рабочая тетрадь сонина и плешакова решебник — Yahoo Search Results Yahoo Web Search Sign in Mail Go to Mail» data-nosubject=»[No Subject]» data-timestamp=’short’ Help Account Info Yahoo Home Settings Home News Mail Finance Tumblr Weather Sports Messenger Settings Yahoo Search query Web Images Video News Local Answers Shopping Recipes Sports Finance Dictionary More Anytime Past day Past week Past month Anytime Get beautiful photos on every new browser window Download ГДЗ по биологии 5 класс рабочая тетрадь Сонин Плешаков gdz-putinainfo › … › Природ/ Биология ГДЗ готовые домашние задания к рабочей тетради природоведению Биология 5 класс Сонин Плешаков ФГОС Дрофа от Путина Рабочая тетрадь по биологии 5 класс НИСонин, ААПлешаков tetrabru/ 5 -klass/biologiya/rabochaya-tetrad-po-biologii Cached Рабочая тетрадь по биологии 5 класс Н И Сонин, ААПлешаков Авторы: Сонин Н И Плешаков АА ГДЗ по биологии 5 класс учебник Сонин Плешаков yagdzcom › 5 класс › Биология ГДЗ » 5 класс » Биология » ГДЗ по биологии 5 класс учебник Сонин Плешаков ГДЗ решебник к учебнику по биологии 5 класс Сонин Плешаков Введение в биологии ФГОС Биология 5 Класс Рабочая Тетрадь Сонина И Плешакова Решебник — Image Results More Биология 5 Класс Рабочая Тетрадь Сонина И Плешакова Решебник images ГДЗ по биологии 5 класс рабочая тетрадь Сонин Плешаков gdzpopme/ 5 -klass/prirod_biologiya- 5 /gdz-po Cached Заходите и находите решебники онлайн прямо на страницах нашего сайта Выберите Вашему вниманию предлагаются ответы к рабочей тетради Биология 5 класс Сонин Плешаков ГДЗ (решебник) по географии 5 класс рабочая тетрадь Баринова otlgdzonline › 5 КЛАСС Решебник (ГДЗ) по географии для 5 класса рабочая тетрадь авторы Баринова, Плешаков, Сонин Ответы к задачам и примерам на отлично ГДЗ по биологии 5 класс рабочая тетрадь Сонин Плешаков gdzcenter › … › Природ/ Биология ГДЗ, учебник, решебник и ответы для — ГДЗ по биологии 5 класс рабочая тетрадь Сонин Плешаков ГДЗ по биологии 5 класс рабочая тетрадь Сонин Плешаков otlgdzonline › 5 КЛАСС Решебник (ГДЗ) по биологии для 5 класса рабочая тетрадь авторы Сонин, Плешаков Ответы к задачам и примерам на отлично ГДЗ по биологии 5 класс Плешаков Сонин учебник gdz-putinainfo › … › Природ/ Биология ГДЗ готовые домашние задания учебника по биология 5 класс Плешаков Сонин ФГОС от Путина ГДЗ рабочая тетрадь по биологии 5 класс Сонин botanamnet › … › 5 класс › Биология Подробный решебник ГДЗ к рабочей тетради по биологии 5 класс Сонин Н И 2015, онлайн ответы на домашнюю работу ГДЗ от Путина рабочая тетрадь по биологии 5 класс Сонин, Плешаков gdz-putinacc › 5 класс › Биология Главная › 5 класс › Биология Ответы к рабочей тетради по биологии за 5 класс Сонин, Плешаков от Путина вы сможете найти на нашем сайте Promotional Results For You Free Download | Mozilla Firefox ® Web Browser wwwmozillaorg Download Firefox — the faster, smarter, easier way to browse the web and all of Yahoo 1 2 3 4 5 Next 5,980 results Settings Help Suggestions Privacy (Updated) Terms (Updated) Advertise About ads About this page Powered by Bing™

  • Сонин (Cфера жизни) можно скачать здесь Ответы к тестам по биологии за 5 класс Сонин НИ (Cфера жизни) можно скачать здесь Ответы к альбому проектов по биологии за 5 класс Сонин НИ можно скачать здесь Упражнения 1 Скрыть 5 ГДЗ Рабочая тетрадь по биологии 5 класс Сонин ieurokiru › rabochaya-tetrad-po-biologii-5-klass… Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте ответы к рабочей тетради биологии для 5 класса автора Сонин
  • Сонин (Cфера жизни) можно скачать здесь Читать ещё Тут отличные гдз по биологии рабочая тетрадь для 5 класса
  • решебник серия: Сфера жизни Биология 5 класс тесты Авторы: Сонин Н И

Сонин НИ Сфера жизни от Путина Очень удобный интерфейс с решениями Ответы к учебнику Плешаков

от издательства Дрофа 2017 ГДЗ содержит все ответы на вопросы и поможет Вам правильно выполнить домашнее задание Ответы к учебнику Плешаков

  • Плешаков
  • онлайн ответы на домашнюю работу ГДЗ от Путина рабочая тетрадь по биологии 5 класс Сонин
  • решебник и ответы для — ГДЗ по биологии 5 класс рабочая тетрадь Сонин Плешаков ГДЗ по биологии 5 класс рабочая тетрадь Сонин Плешаков otlgdzonline › 5 КЛАСС Решебник (ГДЗ) по биологии для 5 класса рабочая тетрадь авторы Сонин

биология 5 класс рабочая тетрадь сонина и плешакова решебник — Все результаты Рабочая тетрадь по биологии 5 класс НИСонин, ААПлешаков tetrabru/5-klass//rabochaya-tetrad-po-biologii-5-klass-nisonin-aapleshakovhtml Похожие Рабочая тетрадь по биологии 5 класс НИ Сонин , АА Плешаков , готовые задания по биологии Издательство-Дрофа, Вертикаль Год-2014 ‎ 28 Как человек изменил Землю · ‎ 5 Живые клетки · ‎ 6 Химический состав клетки ГДЗ по биологии 5 класс рабочая тетрадь Сонин › Биология/Окр мир › 5 класс Похожие Решебник по биологии за 5 класс авторы Сонин издательство Дрофа ГДЗ по биологии 5 класс Сонин (рабочая тетрадь) Здесь расположены готовые домашние задания по биологии за 5 класс Рабочая тетрадь создана для учебника Плешакова , Сонина Эти ответы к ГДЗ по биологии за 5 класс тесты Сонин НИ, Плешаков АА › ГДЗ › 5 класс › Биология › тесты Сонин ГДЗ: Спиши готовые домашние задания тесты по биологии за 5 класс , решебник Сонин НИ, ФГОС, онлайн ответы на GDZRU ГДЗ по биологии за 5 класс рабочая тетрадь Н И Сонин — GDZru › ГДЗ › 5 класс › Биология › Н И Сонин ГДЗ: Спиши готовые домашние задания рабочая тетрадь по биологии за 5 класс , решебник Н И Сонин , ФГОС, онлайн ответы на GDZRU ГДЗ по биологии 5 класс рабочая тетрадь Сонин Плешаков ответы › 5 класс › Природ/Биология ГДЗ ответы на вопросы к рабочей тетради по природоведению Биологии 5 класс Сонин Плешаков ФГОС Дрофа решебник от Путина ГДЗ по Биологии за 5 класс Плешаков АА, Сонин НИ › › 5 класс › Биология › Плешаков АА (Живой организм) Подробный решебник (ГДЗ) по Биологии для 5 класса , Авторы учебника: ГДЗ Рабочая тетрадь биология 5 класс Н И Сонин ГДЗ к тестам по ГДЗ по биологии 5 класс рабочая тетрадь Сонин Плешаков › 5 КЛАСС › ГДЗ по биологии для 5 класса Решебник (ГДЗ) по биологии для 5 класса рабочая тетрадь авторы Сонин , Плешаков Ответы к задачам и примерам на отлично Готовые решения ГДЗ по биологии 5 класс Плешаков, Сонин на ЛОЛ КЕК gdzkekorg/biologiya-5-klass-pleshakov-soninhtml Решебник к учебнику биологии 5-го класса авторов Плешаков , Сонин (с зайцем) Естествознание 5 класс Плешаков ( рабочая тетрадь ) Биология 5 Рабочая тетрадь «Биология: Введение в биологию» 5 класс с › › Рабочие тетради по биологии 5 класс Предлагаемая тетрадь — часть учебного комплекса к учебнику Н И Сонина , А А Плешакова « Биология Введение в биологию 5 класс » Учебник Ответы к рабочей тетради по Биологии 5 класс Сонин Плешаков topgdzru › 5 класс › Биология Рабочая тетрадь по Биологии 5 класс Плешаков 2014; Рабочая тетрадь по Биологии 5 класс Сонин 2015; Рабочая тетрадь по Биологии 5 класс ГДЗ (решебник) по Биологии 5 класс Рабочая тетрадь Сонин gdz-freeru/gdz/Bi5/5 Готовое Домашнее Задание (ГДЗ — решебник ) по Природоведению 5 класс Рабочая тетрадь Сонин , Плешаков — Ваша домашняя работа на 5+ Рабочая программа по биологии (5 класс) на тему: Рабочая 4 апр 2018 г — НИ Сонин , АА Плешаков «Введение в биологию » 5класс : — М: Дрофа, 2012; НИ Сонин Рабочая тетрадь по биологии 5класс Биология Введение в биологию 5 класс Рабочая тетрадь — Ozon wwwozonru › › Федеральный перечень учебников 2018/2019 Похожие Предлагаемая тетрадь — часть учебного комплекса к учебнику НИ Сонина , А А Плешакова » Биология Введение в биологию 5 класс » В нее включены ГДЗ по биологии 5 класс рабочая тетрадь Сонин Плешаков › 5 класс › Природ/Биология На сайте GDZCENTER вы найдете ответы к рабочей тетради Биология 5 класс Сонин Плешаков Вы можете смотреть и читать гдз онлайн (без Рабочая тетрадь по биологии: 5 класс: к учеб НИ Сонина, АА › › 5 класс › Природоведение Рабочая тетрадь по биологии : 5 класс : к учеб НИ Сонина , АА Плешакова Рабочая тетрадь по Природоведению 5 класс Плешаков Сонин gdzmonsternet › 5 класс › Природоведение Рабочая тетрадь по Природоведению 5 класс Плешаков Сонин и компактно разместил на страницах решебника по биологии задания для домашнего Книга Биология 5 класс Введение в биологию Рабочая тетрадь › › Биология 5 класс Введение в биологию Рабочая тетрадь Предлагаемая тетрадь — часть учебного комплекса к учебнику А А Плешакова , Н И Сонина » Биология Введение в биологию 5 класс » Специальными Рабочая тетрадь Биология 5 класс (Сонин Н) — купить по низкой Похожие Предлагаемая тетрадь — часть учебного комплекса к учебнику АА Плешакова , НИ Сонина » Биология Введение в биологию 5 класс » В нее включены «Биология Введение в биологию 5 класс Рабочая тетрадь к Интересные рецензии пользователей на книгу Биология Введение в 5 класс Рабочая тетрадь к учебнику Сонина , Плешакова ФГОС Николай Сонин : Не найдено: решебник Биология Введение в биологию 5 класс Тетрадь для — My-shopru 127,00 ₽ — ‎В наличии Концентрический курс 5 класс Сонин НИ, Плешаков АА (красный) Всеобщая история История Древнего мира 5 класс Рабочая тетрадь №2 Биология 5 класс учебник сонин плешаков скачать hrzservicescom/uploadfiles/biologiya-5-klass-uchebnik-sonin-pleshakov-skachatxml 26 июл 2018 г — Биология 5 класс учебник сонин плешаков скачать Статьи читать онлайн гдз решебник англйська мова 2016 освта Инфо эту книгу биология , Гдз рабочая тетрадь география 5 6 класс, Чаругин учебник Рабочая программа по биологии для 5-го класса (ФГОС) — Инфоурок › Биология Похожие Рабочая программа по биологии в 5 классе разработана на основе Рабочая тетрадь к учебнику НИ Сонина , АА Плешакова « Биология Введение в Ответы@MailRu: н и сонин биология ииедение в биологию 5 класс › Работа, Карьера › Обстановка на работе 4 ответа 10 окт 2014 г — учиться нормально и решать самому, если с 5 -того класса решебниками пользоваться то кто же из вас получиться в качестве знаний и Биология 5 класс Рабочая тетрадь + тестовые задания ЕГЭ Похожие Предлагаемая тетрадь — часть учебного комплекса к учебнику Н И Сонина , А А Плешакова » Биология Введение в биологию 5 класс » Учебник Плешаков Андрей Анатольевич «Биология Введение в биологию 5 класс Рабочая тетрадь к учебнику АА Плешакова Вертикаль ФГОС» в А А Плешакова , НИ Сонина « Биология Введение в биологию 5 класс » Не найдено: решебник Плешаков, Сонин рабочая тетрадь 2015 годСтр 6 — YouTube ▶ 3:27 21 авг 2016 г — Добавлено пользователем GDZ ONLINE Задание № 221 — Математика 5 класс (Виленкин, Жохов) — Duration: 1:38 UrokiTV 1,147 views · 1:38 Language: English; Location ГДЗ от Путина рабочая тетрадь по биологии 5 класс Сонин › 5 класс › Биология Ответы к рабочей тетради по биологии за 5 класс Сонин , Плешаков от Путина вы сможете найти на нашем сайте Помимо подробных и качественных Биология 5 класс По учебнику Плешакова и Сонина Параграф › 5 — 9 классы › Биология 16 сент 2017 г — Биология 5 класс По учебнику Плешакова и Сонина Параграф два вопрос 8 ,10 Рабочая тетрадь Для чего люди изучают природу? Картинки по запросу биология 5 класс рабочая тетрадь сонина и плешакова решебник «id»:»JLIjbksY_IexQM:»,»ml»:»600″:»bh»:90,»bw»:69,»oh»:520,»ou»:» «,»ow»:400,»pt»:»tetrabru/assets/images/15/tetjpg»,»rh»:»tetrabru»,»rid»:»2c7xrQb2f19QyM»,»rt»:0,»ru»:» «,»sc»:1,»st»:»tetrabru»,»th»:95,»tu»:» \u003dtbn:ANd9GcR701EqkH5p-8B_2RcfFuP5VEnbCmMPLzbmAMXLXlIwZtWTLWhCGz9udQ»,»tw»:73 «id»:»8eqszCgbc1gHZM:»,»ml»:»600″:»bh»:90,»bw»:60,»oh»:1200,»ou»:» «,»ow»:804,»pt»:»ozon-stcdnngenixnet/multimedia/1015734987jpg»,»rh»:»ozonru»,»rid»:»e0m91JrijTrQRM»,»rt»:0,»ru»:» «,»sc»:1,»st»:»Ozon»,»th»:102,»tu»:» \u003dtbn:ANd9GcQR9EoW64FKlJGsim0L7wHrKhhsvOvQTIp8X-7_UQ5b38tDiwrzKCg0oj4″,»tw»:68 «id»:»HlIOEJDeCyqKtM:»,»ml»:»600″:»bh»:90,»bw»:61,»oh»:700,»ou»:» «,»ow»:473,»pt»:»ozon-stcdnngenixnet/multimedia/1005495858jpg»,»rh»:»ozonru»,»rid»:»6kAs0dqrnMyB9M»,»rt»:0,»ru»:» «,»sc»:1,»st»:»Ozon»,»th»:102,»tu»:» \u003dtbn:ANd9GcQWTwbhc5pMaWrqx_3F54nyZ6pASs-3_6zzkaZeuB998J-qtAFfA8r4D1k»,»tw»:69 «id»:»icWz_TbSDCoBwM:»,»ml»:»600″:»bh»:90,»bw»:58,»oh»:340,»ou»:» «,»ow»:220,»pt»:»img1labirintru/books36/353789/bigjpg»,»rh»:»labirintru»,»rid»:»Ye7wiw8JcyrsRM»,»rt»:0,»ru»:» «,»sc»:1,»st»:»Лабиринт»,»th»:104,»tu»:» \u003dtbn:ANd9GcT3y0mq8r_x6Vq2iYuGaEoPA1XTpB0SGbiSCprCmKAPq7CBdAhV862E_Q»,»tw»:67 «cb»:3,»cl»:3,»cr»:6,»ct»:3,»id»:»C2TQ_L53-k2eoM:»,»ml»:»600″:»bh»:90,»bw»:62,»oh»:845,»ou»:» «,»ow»:600,»pt»:»cdndrofa-ventanaru/v2/DRF000000000726991/COVER/c»,»rh»:»rosuchebnikru»,»rid»:»9d_vbxvTkMaQpM»,»rt»:0,»ru»:» «,»sc»:1,»st»:»Издательство «Дрофа»,»th»:99,»tu»:» \u003dtbn:ANd9GcSttnjc1f6O_MmaaLbygKCcVwpXN8CB215Tdk46a02CbZGPPR_gmZQ72w»,»tw»:70 «id»:»dHatJ-TCDh8yjM:»,»ml»:»600″:»bh»:90,»bw»:63,»oh»:427,»ou»:» «,»ow»:300,»pt»:»gdzlolbiz/wp-content/uploads/2016/11/pleshakov-so»,»rh»:»gdzlolbiz»,»rid»:»8YrMLkhQ7jOaxM»,»rt»:0,»ru»:» «,»sc»:1,»st»:»ГДЗ ЛОЛ»,»th»:100,»tu»:» \u003dtbn:ANd9GcSjFctcbU8WS4VJUABYVHXYriOgiiY1IDbgdLTQHtbKuHArkvOTlqCkCg»,»tw»:70 «id»:»0MibFg-NRDEBYM:»,»ml»:»600″:»bh»:90,»bw»:70,»oh»:776,»ou»:» «,»ow»:600,»pt»:»cdneurokiorg/system/books/covers/000/004/396/thu»,»rh»:»eurokiorg»,»rid»:»Jm_e1StikhFAyM»,»rt»:0,»ru»:» «,»sc»:1,»th»:95,»tu»:» \u003dtbn:ANd9GcSNwSib5_9QQd-u_FpWM8bxxGo7F9r_DQwc0TFWS47lrFjYURZB4yJ0W04″,»tw»:73 «id»:»yPU6HmXxsiAkOM:»,»ml»:»600″:»bh»:90,»bw»:62,»oh»:700,»ou»:» «,»ow»:482,»pt»:»ozon-stcdnngenixnet/multimedia/1010424097jpg»,»rh»:»ozonru»,»rid»:»F7mPon-600k16M»,»rt»:0,»ru»:» «,»sc»:1,»st»:»Ozon»,»th»:100,»tu»:» \u003dtbn:ANd9GcTiqVhkqeWCjEHv2X38z-M11iTfCObi6pjMFGkMCn5X5n8gEk3zabvfSDk»,»tw»:69 «id»:»bN-AEHmFiRUdXM:»,»ml»:»600″:»bh»:90,»bw»:63,»oh»:430,»ou»:» «,»ow»:300,»pt»:»gdzlolbiz/wp-content/uploads/2017/01/preobrazhens»,»rh»:»gdzlolbiz»,»rid»:»rKPmb2B-C0Ug9M»,»rt»:0,»ru»:» «,»sc»:1,»st»:»ГДЗ ЛОЛ»,»th»:100,»tu»:» \u003dtbn:ANd9GcSBiX8HE0x5LSPRVQu37-Bg5nZW-Vu274ahC2y6EE8T3A9AlxKMwRBTkzo»,»tw»:69 Другие картинки по запросу «биология 5 класс рабочая тетрадь сонина и плешакова решебник» Жалоба отправлена Пожаловаться на картинки Благодарим за замечания Пожаловаться на другую картинку Пожаловаться на содержание картинки Отмена Пожаловаться Все результаты ГДЗ по биологии 5 класс Сонин (рабочая тетрадь) — gdzroomorg Здесь расположены готовые домашние задания по биологии за 5 класс Рабочая тетрадь создана для учебника Плешакова , Сонина Эти ответы к Биология 5 класс Введение в биологию Тесты к учебнику Сонина Биология 5 класс Введение в биологию Тесты к учебнику Сонина , школьным учебникам АА Плешакова , НИ Сонина » Биология Введение в биологию Биология 10 класс Рабочая тетрадь к учебнику Сухоруковой, Задорожный Методическое пособие к учебнику А А Плешакова, Н И Сонина Владислав Сивоглазов , ‎ Валентина Кириленкова — 2018 — ‎Science Запись в рабочей тетради названия первой части учебника 2 В зависимости от особенностей учеников класса и взглядов учителя предлагается Экология изучает Химия — наука о Биология изучает Наука о небесных Горные ГДЗ Рабочая тетрадь по биологии 5 класс Сонин ieurokiru › 5 класс › Биология 5 класс ГДЗ к рабочей тетради 5-го класса по биологии автора Сонин НИ ГДЗ к учебнику Плешаков , Сонин 5 класс находятся здесь стр 5стр 6стр 7стр Гдз биология 5 класс рабочая тетрадь плешаков сонин | pancaco Гдз биология 5 класс рабочая тетрадь плешаков сонин Пояснения к фильтрации результатов Мы скрыли некоторые результаты, которые очень похожи на уже представленные выше (43) Показать скрытые результаты Вместе с биология 5 класс рабочая тетрадь сонина и плешакова решебник часто ищут биология 5 класс плешаков сонин учебник ответы на вопросы гдз по биологии 5 класс рабочая тетрадь плешаков введенский решебник по биологии 5 класс рабочая тетрадь пасечник рабочая тетрадь по биологии 5 класс сонин скачать бесплатно гдз по биологии 5 класс рабочая тетрадь корнилова гдз по биологии 5 класс рабочая тетрадь новикова гдз по биологии 5 класс рабочая тетрадь пасечник суматохин гдз по биологии рабочая тетрадь сонина Ссылки в нижнем колонтитуле Россия — Подробнее… Справка Отправить отзыв Конфиденциальность Условия Аккаунт Поиск Карты YouTube Play Новости Почта Контакты Диск Календарь Google+ Переводчик Фото Ещё Документы Blogger Hangouts Google Keep Подборки Другие сервисы Google

Яндекс Яндекс Найти Поиск Поиск Картинки Видео Карты Маркет Новости ТВ онлайн Музыка Переводчик Диск Почта Коллекции Все Ещё Дополнительная информация о запросе Показаны результаты для Нижнего Новгорода Москва 1 ГДЗ по биологии 5 класс рабочая тетрадь Сонин eurokiorg › …biologiya/5_klass/rabochaya_tetrad…i… Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте ГДЗ рабочая тетрадь по биологии 5 класс Сонин Дрофа Оригинальные современные УМК предполагают активную подготовку к опросам и проверкам в формате ЕГЭ/ОГЭ уже с начала средней школы Для этого разрабатываются и успешно тестируются теоретические пособия и практикумы к ним Читать ещё ГДЗ рабочая тетрадь по биологии 5 класс Сонин Дрофа Оригинальные современные УМК предполагают активную подготовку к опросам и проверкам в формате ЕГЭ/ОГЭ уже с начала средней школы Для этого разрабатываются и успешно тестируются теоретические пособия и практикумы к ним В числе признанных эффективными учителями, пятиклассниками и родителями — рабочая тетрадь по биологии за 5 класс , составителем которой является Сонин Н И Этот сборник, помимо классических заданий, направленных на углубленное изучение, проработку, повторение тем и разделов учебника, включает в себя тренировочные задания Скрыть 2 Решебник и ГДЗ по Биологии за 5 класс рабочая gdz-putinanet › 5-klass-biologiya-sonin-tetrad Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте ГДЗ по Биологии 5 класс Рабочая тетрадь автор: Сонин НИ Решебник и ГДЗ по Биологии для 5 класса рабочая тетрадь , авторы учебника: Сонин НИ на 2017-2018 год Читать ещё ГДЗ по Биологии 5 класс Рабочая тетрадь автор: Сонин НИ Решебник и ГДЗ по Биологии для 5 класса рабочая тетрадь , авторы учебника: Сонин НИ на 2017-2018 год Упражнения 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 Скрыть 3 ГДЗ по биологии 5 класс Сонин ( рабочая тетрадь ) gdzroomorg › biologiya-5…rabochaya-tetradhtml Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Рабочая тетрадь создана для учебника Плешакова , Сонина Эти ответы к рабочей тетради автора Сонин созданы для родителей в помощь при проверке домашней работы в пятом классе по биологии Приятного пользования Читать ещё Рабочая тетрадь создана для учебника Плешакова , Сонина Эти ответы к рабочей тетради автора Сонин созданы для родителей в помощь при проверке домашней работы в пятом классе по биологии Приятного пользования Ответы по биологии 5 класс Сонин ( рабочая тетрадь ): стр 5 стр 6 стр 7 стр 8 стр 9 стр 10 стр 11 стр 12 стр 13 стр 14 стр 15 стр 16 стр 17 стр 18 стр 19 стр 20 стр 21 стр 22 стр 23 стр 24 стр 25 стр 26 стр 27 стр 28 стр 29 стр 30 стр 31 стр 32 стр 33 стр 34 стр 35 стр 36 стр 37 стр 38 стр 39 стр 40 стр 41 стр 42 стр 43 стр 44 стр 45 стр 46 стр 47 Скрыть 4 ГДЗ по биологии за 5 класс рабочая тетрадь Сонин НИ OnlineGdzru › 5-klass/biologiya/sonin-tetrad Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Здесь вы найдете рабочая тетрадь по Биологии 5 класса авторы: Сонин НИ, от издательства Дрофа 2017 ГДЗ содержит все ответы на вопросы и поможет Вам правильно выполнить домашнее задание Ответы к учебнику Плешаков , Сонин (Cфера жизни) можно скачать здесь Ответы к тестам по биологии за Читать ещё Здесь вы найдете рабочая тетрадь по Биологии 5 класса авторы: Сонин НИ, от издательства Дрофа 2017 ГДЗ содержит все ответы на вопросы и поможет Вам правильно выполнить домашнее задание Ответы к учебнику Плешаков , Сонин (Cфера жизни) можно скачать здесь Ответы к тестам по биологии за 5 класс Сонин НИ (Cфера жизни) можно скачать здесь Ответы к альбому проектов по биологии за 5 класс Сонин НИ можно скачать здесь Упражнения 1 Скрыть 5 ГДЗ Рабочая тетрадь по биологии 5 класс Сонин ieurokiru › rabochaya-tetrad-po-biologii-5-klass… Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте ответы к рабочей тетради биологии для 5 класса автора Сонин , созданной для учебника Н И Сонина , А А Плешакова Данный решебник подходит для обеих тетрадей ! ГДЗ к учебнику Плешаков , Сонин 5 класс находятся здесь Читать ещё Друзья, на этой странице сайта ieuroki вы найдете готовые ответы к рабочей тетради биологии для 5 класса автора Сонин , созданной для учебника Н И Сонина , А А Плешакова Существует 2 вида тетрадей этого автора: с синей обложкой и кроликом и с красной обложкой и голубем Данный решебник подходит для обеих тетрадей ! Приятного пользования Авторы: Сонин НИ Издательство: Дрофа ГДЗ к учебнику Плешаков , Сонин 5 класс находятся здесь Скрыть 6 ГДЗ по биологии 5 класс рабочая тетрадь Сонин otlGDZonline › 5-klass/biologiya…rabochaya-tetrad… Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Решебник (ГДЗ) по биологии для 5 класса рабочая тетрадь авторы Сонин , Плешаков Ответы к задачам и примерам на отлично ГДЗ по биологии для 5-го класса выполнены по материалам рабочей тетради Сонина и Плешакова Пятый класс готовит школьникам интересный материал по изучению живых Читать ещё Решебник (ГДЗ) по биологии для 5 класса рабочая тетрадь авторы Сонин , Плешаков Ответы к задачам и примерам на отлично Готовые решения ГДЗ по биологии для 5-го класса выполнены по материалам рабочей тетради Сонина и Плешакова Пятый класс готовит школьникам интересный материал по изучению живых организмов на земле и планете в целом, их свойств и взаимодействия друг с другом Задания подкреплены изображениями, что облегчает понимание достаточно объемного материала Биология является гуманитарным предметом, включающим в себя многообразие тем о живой и неживой природе И как любая гуманитарная наука, является объемной Скрыть 7 ГДЗ по биологии для 5 класса рабочая тетрадь Сонин GdzPutinaru › po-biologii/5-klass/sonin-tetrad Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Тут отличные гдз по биологии рабочая тетрадь для 5 класса , Сонин НИ Сфера жизни от Путина Очень удобный интерфейс с решениями Ответы к учебнику Плешаков , Сонин (Cфера жизни) можно скачать здесь Читать ещё Тут отличные гдз по биологии рабочая тетрадь для 5 класса , Сонин НИ Сфера жизни от Путина Очень удобный интерфейс с решениями Ответы к учебнику Плешаков , Сонин (Cфера жизни) можно скачать здесь Ответы к тестам по биологии за 5 класс Сонин НИ (Cфера жизни) можно скачать здесь Ответы к альбому проектов по биологии за 5 класс Сонин НИ можно скачать здесь Упражнения 1 Скрыть 8 ГДЗ по биологии 5 класс Сонин рабочая тетрадь ответы NewGDZnet › ГДЗ › 5 класс › …sonin-rabochaya-tetrad-5 Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Решебник на домашние задания по биологии за 5 класс на рабочую тетрадь Сонин НИ (к учебнику Плешакова , Сонина ) — смотреть онлайн ответы на сайте ГДЗ по-новому 9 ГДЗ по биологии за 5 класс рабочая тетрадь Сонин НИ GDZru › class-5/biologiya/sonin-tetrad/ Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте ГДЗ рабочая тетрадь по биологии 5 класс Сонин НИ ФГОС ГДЗ: Спиши готовые домашние задания рабочая тетрадь по биологии за 5 класс , решебник серия: Сфера жизни Биология 5 класс тесты Авторы: Сонин Н И , Плешаков АА Читать ещё ГДЗ рабочая тетрадь по биологии 5 класс Сонин НИ ФГОС Автор : Сонин НИ Издательство: Дрофа серия: Сфера жизни ГДЗ: Спиши готовые домашние задания рабочая тетрадь по биологии за 5 класс , решебник Сонин НИ, ФГОС, онлайн ответы на GDZRU Рекомендуем посмотреть Биология 5 класс Авторы: Н И Сонин , А А Плешаков издательство: Дрофа серия: Сфера жизни Биология 5 класс тесты Авторы: Сонин Н И , Плешаков АА издательство: Дрофа серия: Сфера жизни Биология 5 класс альбом проектов Авторы: Сонин НИ, Пшеничная ЛЮ издательство: Дрофа Быстрый поиск Скрыть 10 Рабочая тетрадь по Биологии 5 класс Сонин Плешаков GdzMonsternet › 5-klass/rabochaya-tetrad…biologii… Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Выберите подходящее издание решебника Рабочая тетрадь по Биологии 5 класс Плешаков Сонин Читать ещё Выберите подходящее издание решебника Рабочая тетрадь по Биологии 5 класс Плешаков Сонин Рабочая тетрадь по Биологии 5 класс Сонин Плешаков Рабочая тетрадь по Биологии 5 класс Плешаков Сонин Биология 5 класс Плешаков Сонин Биология 5 класс Плешаков Введенский Биология 5 класс Сонин Плешаков Рабочая тетрадь по Биологии 5 класс Сонин Плешаков Готовые задания 3 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 4-5 100 101 26-27 28-29 30-31 32-33 34-35 36-37 38-39 40-41 42-43 44-45 46-47 48-49 50-51 52-53 54-55 56-57 58-59 60-61 62-63 Скрыть Рабочая тетрадь Биология 5 класс ( сонин Н) — купить Доставка Акции Книги Канцтовары chitai-gorodru › Рабочая-тетрадь-Биол Не подходит по запросу Спам или мошенничество Мешает видеть результаты Информация о сайте реклама Подборки учебников и рабочих тетрадей Акции и скидки Удобные способы доставки Контактная информация +7 (495) 444-84-44 пн-вс 9:00-21:00 Магазин на Маркете 18+ Рабочие тетради скачать / litresru litresru Не подходит по запросу Спам или мошенничество Мешает видеть результаты Информация о сайте реклама Скачать школьные учебники с 1 по 11 класс в электронном виде Онлайн Контактная информация +7 (800) 333-27-37 круглосуточно Магазин на Маркете 18+ Вместе с « биология 5 класс рабочая тетрадь сонина и плешакова решебник » ищут: биология рабочая тетрадь 5 класс сонина плешакова ответы биология 5 класс учебник русский язык 5 класс ладыженская учебник 2 часть что указывает на единство живой и неживой природы 1 2 3 4 5 дальше Браузер Ускоряет загрузку файлов при медленном соединении 0+ Скачать

% PDF-1. 4 % 1108 0 объект > эндобдж xref 1108 89 0000000016 00000 н. 0000002938 00000 н. 0000003098 00000 н. 0000004136 00000 п. 0000004747 00000 н. 0000005004 00000 н. 0000005192 00000 н. 0000005611 00000 н. 0000006014 00000 н. 0000006454 00000 п. 0000007011 00000 п. 0000007461 00000 н. 0000007777 00000 н. 0000008086 00000 н. 0000008125 00000 н. 0000008304 00000 п. 0000008412 00000 н. 0000008527 00000 н. 0000008640 00000 н. 0000009140 00000 н. 0000009522 00000 н. 0000009960 00000 н. 0000010219 00000 п. 0000011167 00000 п. 0000011422 00000 п. 0000011561 00000 п. 0000011700 00000 п. 0000012223 00000 п. 0000012712 00000 п. 0000012741 00000 п. 0000013291 00000 п. 0000014682 00000 п. 0000015265 00000 п. 0000015524 00000 п. 0000016072 00000 п. 0000017353 00000 п. 0000018498 00000 п. 0000020107 00000 п. 0000021521 00000 п. 0000022856 00000 п. 0000024191 00000 п. 0000031872 00000 п. 0000042760 00000 п. 0000043209 00000 п. 0000053261 00000 п. 0000058555 00000 п. 0000058911 00000 п. 0000059769 00000 п. 0000059905 00000 н. 0000059976 00000 п. 0000072494 00000 п. 0000083618 00000 п. 0000083890 00000 н. 0000084014 00000 п. 0000084139 00000 п. 0000084266 00000 п. 0000084337 00000 п. 0000084432 00000 п. 00000 00000 п. 00000

    00000 п. 00000 00000 п. 00000 00000 н. 0000091284 00000 п. 0000100469 00000 н. 0000100733 00000 н. 0000101148 00000 н. 0000110222 00000 п. 0000110486 00000 н. 0000110957 00000 н. 0000111036 00000 н. 0000111325 00000 н. 0000111404 00000 н. 0000111686 00000 н. 0000111765 00000 н. 0000111844 00000 н. 0000111920 00000 н. 0000112019 00000 н. 0000112170 00000 н. 0000112487 00000 н. 0000112544 00000 н. 0000112662 00000 н. 0000112741 00000 н. 0000112855 00000 н. 0000113147 00000 н. 0000113426 00000 н. 0000120408 00000 н. 0001536363 00000 п. 0000002734 00000 н. 0000002116 00000 п. трейлер ] / Назад 2475663 / XRefStm 2734 >> startxref 0 %% EOF 1196 0 объект > поток h ތ_ HSq? n ^ 3rJQ & Ȓ (S54H = X? X E-JXEQF «5pʠ» Wт ^ ~ C [y 0U; 6o ^ vLz ֙ A: _ ~ 3ukcM &? DJÛf ֜ퟸ ^ #> UvhK [> ߁ * o̓g {_, ljP ^ O = 7 | xZs \: 8Wr \ b ^ 1y *, \ Ao. ki = c] u) ᒐ R, & A9f # m # G’3MHIcũsD @ $% CS9RK; w ۞ СЕКС [AYF; MAN-Q / 4VOo # U! N + q! Уравнение ~ ѐ «B $ ZC1! ‘* (톬 ᜕ ճ [Hf1NJ͢1m \ ȝ FI?% &

    Вовлечение регулятора малого GTP-связывающего белка (G-протеина), стимулятор диссоциации малого G-протеина GDP, в Antiapoptotic Cell Survival Signaling

    Abstract

    Малый GTP-связывающий белок GDP-стимулятор диссоциации (Smg GDS) регулирует GDP / GTP-обменную реакцию Ki-Ras и членов семейства Rho и Rap1 и ингибирует их связывание с мембранами.В фибробластах Smg GDS проявляет митогенную и трансформирующую активность в сотрудничестве с Ki-Ras. Однако физиологическая функция Smg GDS остается неизвестной. Здесь мы показываем, что мыши, лишенные Smg GDS, умерли от сердечной недостаточности вскоре после рождения, не в результате пороков развития сердца, а в результате усиленного апоптоза кардиомиоцитов, вызванного перегрузкой сердечно-сосудистой системы. Кроме того, неонатальные тимоциты и развивающиеся нейрональные клетки претерпевают апоптотическую гибель клеток. Smg GDS — / — тимоциты были восприимчивы к индукторам апоптоза, таким как этопозид и УФ-облучение.Smg GDS — / — тимоциты были защищены от вызванной этопозидом гибели клеток путем трансдукции ex vivo кДНК Smg GDS. Эти фенотипы частично совпадают с фенотипами, наблюдаемыми у Ki-Ras-дефицитных мышей, предполагая, что Smg GDS участвует в передаче сигналов выживания антиапоптотических клеток через Ki-Ras.

    ВВЕДЕНИЕ

    Малые GTP-связывающие белки (G-белки) состоят из пяти семейств: семейств Ras, Rho, Rab, Arf / Sar и Ran (Bourne et al. , 1990, 1991; Hall, 1990; Takai et al., 1992). Семейство Ras в основном регулирует экспрессию генов; семейство Rho в основном регулирует цитоскелет и экспрессию генов; семейства Rab и Arf / Sar регулируют перенос пузырьков; а семейство Ran регулирует транспорт между цитозолем и ядром. Таким образом, функции многих малых G белков были выяснены, но остается неизвестным, как и когда отдельные члены суперсемейства взаимодействуют и обмениваются сигналами, чтобы эффективно регулировать многоклеточные функции.

    Мы попытались подавить активность малых G-белков путем нарушения их регуляторов.Малые G-белки служат в качестве молекулярного переключателя для передачи сигналов путем обмена состояниями, связанными с GTP и GDP. Было идентифицировано три типа регуляторов: это белки обмена гуанин-нуклеотидов (GEP), ингибиторы диссоциации GDP (GDI) и белки, активирующие GTPase. GEP преобразуют неактивную форму, связанную с GDP, в активную форму, связанную с GTP, стимулируя отделение GDP от формы, связанной с GDP; GDI ингибируют GEP-индуцированное преобразование из формы, связанной с GDP, в форму, связанную с GTP, путем ингибирования диссоциации GDP от формы, связанной с GDP; и белки, активирующие GTPase, превращают GTP-связанную форму в GDP-связанную форму, стимулируя активность GTPase (Takai et al., 1993). Хотя эти регуляторы необходимы для повышения эффективности передачи сигналов, опосредованной малым G-белком, они не всегда важны для жизнеспособности мышей с нокаутом. Мы успешно получили мышей, лишенных Rho GDIα (Togawa et al. , 1999), и обнаружили, что дефицит этого белка приводит к менее вредному фенотипу, чем дефицит самого его субстратного малого G-белка. Действительно, это также относится к дефициту стимулятора диссоциации малого G-белка GDP (Smg GDS).

    Smg GDS — четвертый тип регулятора малых G-белков. Этот регулятор был первоначально выделен из цитозоля бычьего мозга в качестве регулятора Rap1B (Yamamoto et al. , 1990). Впоследствии мы выделили кДНК Smg GDS быка и человека и определили их нуклеотидные и аминокислотные последовательности (Kaibuchi et al. , 1991; Kikuchi et al. , 1992). В бесклеточной системе с использованием очищенных образцов Smg GDS стимулирует диссоциацию GDP от группы малых G-белков, включая не только Rap1B, но также Ki-Ras и подсемейства Rho, Rac и Cdc42, но неактивен на Ha-Ras ( Mizuno et al., 1991; Ando et al. , 1992; Hiraoka et al. , 1992; Яку и др. , 1994). Эта субстратная специфичность отличается от специфичности других GEP, таких как son of sevenless (Simon et al. , 1991) и Cdc25 (Jones et al. , 1991) для подсемейства Ras и C3G (Gotoh et al. al. , 1995) и фактор обмена гуанин-нуклеотида Epac / cAMP (de Rooij et al. , 1998; Kawasaki et al. , 1998) для подсемейства Rap, но аналогичен таковым GDI, таким как Rho GDI (Takai et al., 1993) и Rab GDI (Takai et al. , 1993). В интактных клетках NIh4T3 Smg GDS проявляет трансформирующую активность в сотрудничестве с Ki-Ras (Fujioka et al. , 1992), а в клетках Swiss 3T3 он проявляет митогенную активность в сотрудничестве с Ki-Ras или Rap1 (Yoshida et al. , 1992), предполагая, что Smg GDS действует как стимулирующий регулятор для этих малых G-белков в интактных клетках, как описано для Cdc25 и , сына sevenless (Crechet et al., 1990; Hughes et al., 1990; Bonfini et al. , 1992). Однако физиологическая функция Smg GDS еще не установлена.

    В этом исследовании мы сообщаем, что дефицит Smg GDS у мышей приводит к усилению апоптоза в различных типах клеток, включая кардиомиоциты, тимоциты и нейрональные клетки, и что эти фенотипы коррелируют с фенотипами мышей с дефицитом Ki-Ras, предполагая, что Smg GDS регулирует, по крайней мере, передачу сигналов выживания антиапоптотических клеток, предположительно через Ki-Ras.

    МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

    Скрининг библиотеки ДНК

    КДНК Smg GDS была выделена из библиотеки кДНК мозга мыши λ TriplEx ( Clontech , Palo Alto, CA) с использованием бактериальных штаммов и протокола производителя и секвенирована с использованием Applied Biosystems ( Фостер-Сити, Калифорния) секвенатор ДНК.Фрагмент кДНК, кодирующий N-концевую половину области Smg GDS, субклонировали в соответствующие плазмидные векторы и использовали в качестве зонда для скрининга гомологии мышиной геномной библиотеки 129SVJ λ FIXII (Stratagene, La Jolla, CA).

    Получение Smg GDS — / — мышей

    Нацеливающая конструкция была сделана для замены 3′-половины кодирующего экзона 5 и следующих экзонов 6 и 7 (аминокислоты 212–343 белка Smg GDS) на новый кассета гена устойчивости. Эмбриональные стволовые (ES) клетки RW4 трансфицировали и отбирали, как описано (Togawa et al., 1999). Гомологичные рекомбинанты проверяли гибридизацией по Саузерну с использованием 5′- и 3′-внешних зондов и зонда гена нео-устойчивости. Smg GDS +/- ES клетки микроинъектировали в эмбриональные бластоцисты C57BL / 6J на 3,5-й день (E3.5) и переносили псевдобеременным приемным матерям MCH для получения химер, которые были скрещены с мышами BDF1 для передачи зародышевой линии. Мышей с мутантными аллелями также скрещивали с мышами C57Bl / 6. Генотипирование проводили гибридизацией по Саузерну и ПЦР с использованием праймеров в гене neo (5′-CCGCTTGGGTGGAGAGGCTAT-3 ‘и 5′-TGGTGGTCGAATGGGCAGGTA-3′) и в замененном гене Smg GDS (5’-TCCCCGCTATCTTCAGTATCT-3 ‘и 5′-TCCCCGCTATCTTCAGTATCT-3′ и 5’-TCCCCGCTATCTTCAGTATCT-3 ‘ GCACAGTATTCAAAACCATCC-3 ‘).Смеси для ПЦР денатурировали в течение 2 мин при 95 ° C и отжигали в течение 1 мин при 55 ° C. ПЦР выполняли 25 циклов следующим образом: продлить в течение 2 минут при 72 ° C, денатурировать в течение 30 секунд при 95 ° C и отжиг в течение 1 минуты при 55 ° C. Образцы расширяли еще на 5 мин при 72 ° C. Продукты ПЦР визуализировали на гелях 4% 3: 1 NuSieve-агарозы (Takara, Беркли, Калифорния), трисацетата и ЭДТА.

    Антитела и вестерн-блот-анализ

    Антитело против Smg GDS получали, как описано (Kikuchi et al. , 1992).Мозг мышей гомогенизировали в буфере для лизиса 320 мМ сахарозы, 20 мМ трис-Cl, pH 7,5, 2 мМ EDTA и 10 мМ PMSF. Пятьдесят микрограммов белков разделяли с помощью SDS-PAGE, переносили на мембрану Immobilon (Millipore, Bedford, MA) и блокировали в течение 1 часа в трис-буферном физиологическом растворе, содержащем 5% BSA. После инкубации с антителом против Smg GDS в течение 1 часа, а затем с вторичным антителом, конъюгированным с пероксидазой, в течение 1 часа, блоты проявляли с помощью ECL (Amersham Pharmacia Biotech, Уппсала, Швеция).

    ПЦР с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР)

    Суммарную РНК экстрагировали из мозга мышей каждого генотипа с использованием реагента TRIzol (Life Technologies, Gaithersburg, MD) и обрабатывали в соответствии с протоколом производителя. КДНК первой цепи генерировали с использованием обратной транскриптазы Молони и реагентов, поставляемых с набором для синтеза кДНК (Stratagene). Для анализа экспрессии мРНК Smg GDS 20% (4 мкл) реакции использовали в 50-мкл ПЦР-амплификации с использованием 5 ЕД ДНК-полимеразы Taq , 2 мМ MgCl 2 , 150 мкМ dNTP, 1 мкМ праймеров. (праймер 1, 5′-AAGCTACTGGGCATTCACTGC-3 ‘и праймер 2, 5′-TTTCTGCATGGACTCATCTCC-3’).ПЦР выполняли в течение 25 циклов следующим образом: продлить в течение 2 минут при 72 ° C, денатурировать в течение 30 секунд при 95 ° C и отжиг в течение 1 минуты при 55 ° C. Образцы расширяли еще на 5 мин при 72 ° C. Продукты ПЦР подвергали электрофорезу в 4% гелях агарозы Nusieve (3: 1) (Takara) и анализировали гибридизацией по Саузерну с использованием зонда кДНК Smg GDS. Для анализа дифференцировки сердечных мышц РНК получали из эмбриональных сердец на 17,5 дне после полового акта (dpc) и проводили ОТ-ПЦР, как описано (Lyons et al. , 1995), с использованием праймеров 5′-ACACACTCTCTTCACCTGGC-3 ‘и 5 ‘-ATGAAACTCCAAGCTGGGGC-3′ для легкой цепи миозина 1A (MLC-1A), праймеры 5’-ATATCATGGCGAGCTGAGCC-3 ‘и 5′-AGAGTGACTGCAGGAGTCCG-3′ для MLC-1V и праймеры 5’-TGTGTCCTCGACG -CTCAGTCCTTCTCTTCTCCG-3 ‘для MLC-2V.

    Гистологический анализ

    Эмбрионы и новорожденных мышей фиксировали в растворе Буэна или 4% параформальдегида, заливали парафином, делали серийные срезы (5 мкм) и окрашивали гематоксилином и эозином (HE). Окрашивание, опосредованное терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазой dUTP, окрашивание ника-конца (TUNEL) проводили на фиксированных параформальдегидом срезах с использованием набора для обнаружения апоптоза in situ (Takara). Вкратце, срезы инкубировали с протеиназой К (20 мкг / мл) в течение 15 минут при 37 ° C, а затем эндогенную пероксидазу блокировали инкубацией в 3% H 2 O 2 .После промывки PBS реакционную смесь TUNEL, содержащую фермент терминальную дезоксинуклеотидилтрансферазу и буфер для мечения, наносили на срезы во влажной камере и инкубировали в течение 75 мин при 37 ° C. Затем срезы трижды промывали PBS, инкубировали с антителом, конъюгированным с FITC HRP, в течение 30 минут, дважды промывали и визуализировали с помощью 3,3′-диаминобензидинтетрагидрохлорида и H 2 O 2 . Наконец, срезы контрастировали гематоксилином. Для мечения бромдезоксиуридином (BrdU) in vivo BrdU (0.5 мг, растворенных в 0,5 мл физиологического раствора на мышь) вводили внутрибрюшинно беременным самкам на 11,5 и 12,5 дня беременности. Самок умерщвляли через 1 ч после инъекции; эмбрионы фиксировали в 4% параформальдегиде при 4 ° C в течение ночи и обрабатывали для иммуногистохимии, как описано (Fushiki et al. , 1997).

    Индукция апоптоза в тимоцитах Ex vivo

    Суспензии единичных клеток тимуса новорожденных дважды промывали в среде RPMI 1640 с добавлением 10% FCS, обработанной декстрановым углем, и инкубировали в течение 30 минут при 37 ° C в 5% CO 2 для удаления эндогенных глюкокортикоидов.Тимоциты высевали в количестве 1 × 10 6 / мл в 24-луночные планшеты для культивирования тканей и обрабатывали следующими стимулами клеточной гибели: дексаметазон (Sigma, Сент-Луис, Миссури), этопозид ( Clontech ), антитело против Fas. Jo2 (ФарМинген, Сан-Диего, Калифорния) плюс 30 мкг / мл циклогексимида и УФ-облучение. Активность каспазы-3 измеряли с использованием набора для флуоресцентного анализа ApoAlert CPP32 / Casp-3 ( Clontech ). Расщепление ацетил-аспартил-глутамил-валил-аспарт-1-альдегид-7-амино-4-трифторметил кумарина измеряли с помощью флюороспектрофотометра (RF-1500; Shimadzu, Tokyo, Japan).Тимоциты окрашивали йодидом пропидия (Sigma), аннексином V (PharMingen) и антителами против CD4 и CD8 и анализировали с помощью проточного цитометра с двойным лазером FACSVantage (Becton-Dickinson, San Jose, CA).

    Ретровирус-опосредованный перенос гена

    Полноразмерная кДНК Smg GDS и кДНК усиленного зеленого флуоресцентного белка (EGFP) в качестве контроля были субклонированы в ретровирусный вектор pLNCX по сайту Hpa I и трансфицированы в клетки PT96 для получения инфекционных рекомбинантных ретровирусы.Упаковывающие клетки отбирали на 1 неделю в присутствии G418 (500 мкг / мл). Ретровирусную трансдукцию выполняли, как описано в протоколе производителя ( Clontech ). Среды для культивирования клеток, содержащие 10 6 –10 7 вирусных частиц / мл, фильтровали через фильтр 0,45 мкм (Millipore) и добавляли к 1 × 10 6 тимоцитов на 24 часа, чтобы обеспечить экспрессию генов. Затем тимоциты обрабатывали этопозидом, чтобы вызвать апоптоз.

    РЕЗУЛЬТАТЫ

    Генерация Smg GDS — / — Мыши

    Ген Smg GDS мыши включает девять экзонов, которые охватывают транслируемую область, кодирующую 558 аминокислот.Экзон 9 кодирует функциональный домен, расположенный на C-концевой пятой части Smg GDS (аминокислотные остатки 442–492), мутации которого полностью устраняют активность обмена GTP / GDP in vitro на Ki-Ras, Rap1 и RhoA (Kotani et al. , 1992). Затем мы создали клетки Smg GDS +/- ES путем гомологичной рекомбинации с использованием вектора нацеливания, предназначенного для удаления 1,7 т.п.н. геномной ДНК, содержащей 3′-половину кодирующего экзона 5 и следующие экзоны 6 и 7 гена Smg GDS (рис. ). Когда нацеливающую конструкцию электропорировали в ES-клетки, были получены три G418-устойчивые колонии, гетерозиготные по гену Smg GDS.Генотипы колоний, устойчивых к G418, были подтверждены саузерн-блоттингом. Эти клоны ES были использованы для создания химерных мышей и успешно способствовали передаче зародышевой линии. Гетерозиготы Smg GDS скрещивали с получением гомозиготного мутантного потомства (фигура, B и C). Мыши, гомозиготные по нарушенному аллелю, не экспрессировали ни интактный белок Smg GDS, как анализировали с помощью иммуноблоттинга с использованием антитела, специфичного для C-концевого домена, ни продукт RT-PCR, полученный из мРНК Smg GDS (фиг., D и E).Хотя остается вероятность того, что экзоны 1–4 целевого аллеля могут генерировать N-концевую третью часть Smg GDS, такой усеченный продукт потерял бы физиологическую роль, поскольку ранее мы показали, что C-концевой домен по существу является необходим для активности Smg GDS (Kotani et al. , 1992). Мы пришли к выводу, что это нарушение приводит к появлению мышей, которые функционально нулевые для Smg GDS.

    Направленное нарушение гена Smg GDS. (A) Структура гена Smg GDS мыши с кодирующими экзонами 3-8 показана вверху.Нацеливающий вектор был сконструирован для удаления части экзона 5 и следующих экзонов 6 и 7. Конструкция содержала 5′-фланкирующие последовательности размером 3,3 т.п.н. и фланкирующие последовательности размером 4,9 т.п.н. Кассета MC1-neo была вставлена ​​в сайт Pst I внутри экзона 5, но 5′-акцепторный сайт сплайсинга остался нетронутым. Кассету дифтерийного токсина А вставляли на 3′-конце. В целевом аллеле кассета MC1-neo заменяет 1,7 т.п.н. области геномной ДНК. Гомологичную рекомбинацию проверяли с использованием информативных рестрикционных фрагментов и диагностических зондов, как указано.(B) Саузерн-гибридизация с использованием ДНК, расщепленной Spe I, экстрагированной из хвостов мыши, и 3′-внешнего зонда, показанного на A. Генотип мыши был идентифицирован с помощью 6,8 т.п.н. дикого типа (WT) и мутанта 5,5 т.п.н. (MT ) фрагменты. Дорожки 1 и 5 — мыши дикого типа; дорожки 2, 4, 6 и 7 — мыши Smg GDS +/-; дорожка 3, Smg GDS — / — мышь. (C) Генотипирование с помощью ПЦР-анализа ДНК, выделенной у мышей из однопометника в возрасте 21 дня. Праймеры для ПЦР были выбраны для получения продукта ДНК длиной 584 п.н., указывающего на аллель дикого типа (WT), или продукта длиной 370 п.о., приписываемого целевому (MT) аллелю GDS Smg.Дорожка 1, мышь дикого типа; дорожка 2, Smg GDS +/- мышь; дорожка 3, Smg GDS — / — мышь. (D) Вестерн-блоттинг белков, экстрагированных из мозга каждого генотипа. Была обнаружена полоса 61 кДа белка Smg GDS. Дорожка 1, мышь дикого типа; дорожка 2, Smg GDS +/- мышь; дорожка 3, Smg GDS — / — мышь. (E) Анализ RT-PCR с использованием праймеров, охватывающих интроны, расположенных в экзонах 5 и 7, и мРНК Smg GDS из мозга каждого генотипа. Полосу из 366 п.н. амплифицировали с помощью праймеров, специфичных для Smg GDS. Дорожка 1, мышь дикого типа; дорожка 2, Smg GDS +/- мышь; дорожка 3; Smg GDS — / — мышь.

    Требование Smg GDS для выживания новорожденных

    Гетерозиготные мыши Smg GDS были жизнеспособными без поддающегося обнаружению фенотипа. Напротив, дефицит Smg GDS привел к необычно низкому уровню живых Smg GDS — / — мышей. При гетерозиготных скрещиваниях гомозиготные мыши составляли 7% от общего числа мышей в возрасте 3 недель, что значительно ниже ожидаемого соотношения 25% (таблица). Генотипирование эмбрионов не показало доказательств эмбриональной летальности, тем не менее, предполагая, что Smg GDS не важен для развития мышей, но участвует в постнатальном выживании.Затем мы определили процент выживания мышей Smg GDS — / — через 0–10 дней после рождения. Около 70% мышей Smg GDS — / — умерли в течение 5 дней после рождения (Рисунок A). Эти мыши становились слабыми через 0–2 дня после рождения (постнатальный день 0 [P0] –P2) и имели тенденцию умирать в течение 20–30 часов от появления симптомов. Примерно 30% мышей Smg GDS — / — пережили критический период. Эти выжившие мыши почти нормально развивались в среде, свободной от конкретных патогенов, и они были фертильными и жизнеспособными в течение> 6 месяцев. Выживаемость потомства Smg GDS — / — второго поколения также составила около 30%, что согласуется с показателями, наблюдаемыми у мышей Smg GDS — / -, возникших в результате начальных гетерозиготных скрещиваний (Рисунок B).Более того, эта тенденция к выживанию сохранялась в генетическом фоне C57Bl / 6 после трех поколений обратного скрещивания (наши неопубликованные результаты). Эти данные показывают, что мыши Smg GDS — / — находятся в значительно более неблагоприятном положении по сравнению с однопометниками дикого типа и Smg GDS +/-, и что такое свойство генетически связано с дефицитом Smg GDS.

    Таблица 1

    Генотипирование живых мышей, полученных в результате гетерозиготных скрещиваний Smg GDS

    Стадия Генотип Smg GDS-дефицитных мышей
    + / + (%) +/- (%) — / — (%)
    E12.5 9/43 (21) 20/43 (47) 14/43 (32)
    E13.5 19/65 (29) 26/65 (40) 20/65 (31)
    E18.5 19/64 (30) 29/64 (45) 16/64 (25)
    P0 – P7 44/143 ( 31) 89/143 (62) 10/143 (7)
    P21 75/270 (28) 177/270 (66) 18/270 (7)

    Продолжительность жизни Smg GDS — / — мышей.(A) Процент выживаемости мышей Smg GDS — / — первого поколения, полученных в результате гетерозиготных скрещиваний (n = 274). (B) Процент выживаемости мышей Smg GDS — / — второго поколения, полученных от гомозиготных скрещиваний (n = 42). Результаты были аналогичными в генетическом фоне 129 / BDF и 129 / C57BL (наши неопубликованные результаты).

    Сердечная недостаточность у мышей Smg GDS — / —

    Мы исследовали мышей Smg GDS — / — через 1 день после рождения как на макроскопическом, так и на микроскопическом уровне. Примерно у двух третей из них наблюдались признаки сердечной недостаточности: цианоз, отек, снижение тургора кожных покровов.Сердце Smg GDS — / — было макроскопически увеличено, как и ожидалось; стенки предсердий, желудочков и перегородки были чрезвычайно тонкими. Гистологически камеры предсердий и желудочков были расширены и ассоциировались со сниженной трабекуляцией по сравнению с сопоставимыми однопометниками дикого типа (рисунок, Aa и Ba). Миокард сердца Smg GDS — / — показал заметно сниженную клеточность, но не был связан с инфильтрацией воспалительных клеток (рисунок, Ab и Bb). Печень и легкие мышей Smg GDS — / — прибавили в весе, 1.В 2–1,5 раза больше, чем в контрольной группе из однопометников, и по гистологическим характеристикам обнаружена выраженная гиперемия (наши неопубликованные результаты). Напротив, у одной трети мышей Smg GDS — / — не было выявлено значительных патологических аномалий сердца. Взятые вместе, мы заключаем, что неонатальная смерть, наблюдаемая у 70% мышей Smg GDS — / -, вызвана сердечной недостаточностью. Эти морфологические изменения сердца Smg GDS — / — оказались очень похожими на изменения сердца Ki-Ras — / — (Koera et al. , 1997).

    Гистология срезов сердца мышей дикого типа и Smg GDS — / — и усиленный апоптоз в сердце Smg GDS — / -.(Aa и Ba) Репрезентативные сагиттальные срезы (20 ×) сердца дикого типа (Aa) и Smg GDS — / — сердца (Ba), окрашенные HE через 1 день после рождения. Сердце Smg GDS — / — было расширено и расширено за счет истончения стенок предсердий, желудочков и перегородки по сравнению с контрольным однопометником. (Ab и Bb) Стенки левого желудочка (области в прямоугольниках на Aa и Ba) сердца дикого типа (Ab) и сердца Smg GDS — / — (Bb) при большом увеличении (200 ×). Клеточность кардиомиоцитов заметно снижена в Smg GDS — / — сердце.(Ca и Da) ТУНЕЛЬНОЕ окрашивание сердца Smg GDS +/− и сердца Smg GDS — / -. Они были приготовлены из мышей из однопометника. Сердце Smg GDS — / — (20 ×; Да) в день рождения показало консервативную архитектуру по сравнению с сердцем дикого типа (20 ×; Са). Клеточность Smg GDS — / — кардиомиоцитов не снижалась в отличие от выраженной гипоцеллюлярности кардиомиоцитов через 1 день после рождения, как показано на Ва и Вb. (Cb и Db) Среднее увеличение (100 ×) правых желудочков сердца Smg GDS +/- (Cb; обведено Ca) и сердца Smg GDS — / — (Db; обведено Da).Обратите внимание, что TUNEL-положительные клетки локализуются исключительно в правом желудочке сердца Smg GDS +/-, тогда как TUNEL-положительные клетки обнаруживаются в обоих желудочках сердца Smg GDS — / -. (Dc и Dd) Среднее увеличение (100 ×; Dc) и большое (200 ×; Dd) увеличение стенки левого желудочка (в рамке Da) сердца Smg GDS — / -. Многочисленные апоптотические кардиомиоциты были легко обнаружены в эндокарде сердца Smg GDS — / -, тогда как апоптотические клетки не были обнаружены в стенке левого желудочка сердца Smg GDS +/–.lv и rv, левый и правый желудочки соответственно.

    Апоптоз в Smg GDS — / — кардиомиоцитах

    Мы спросили, является ли гипоцеллюлярность и аномальная архитектура сердца Smg GDS — / — следствием снижения пролиферативного потенциала или усиленного апоптоза. Фактически, долгое время считалось, что путь Ras / MAPK участвует в пролиферации клеток, опосредуя митогенные сигналы (Buday and Downward, 1993; Egan et al. , 1993; Liu et al. , 1993; Войтек и др., 1993), но недавно было показано, что Ras опосредует передачу сигналов выживания клеток у беспозвоночных (Bergmann et al. , 1998a, b; Kurada and White, 1998) и линии кроветворных клеток мышей BaF3 (Walker et al. , 1998). Чтобы рассмотреть возможность того, что повышенный апоптоз кардиомиоцитов приведет к истончению стенок предсердий, желудочков и перегородки сердца Smg GDS — / — через 1 день после рождения, мы исследовали сердца эмбрионов E18.5 и новорожденных мышей P0, используя Окрашивание TUNEL, потому что апоптотические клетки могли быть обработаны и исчезли через 1 день после рождения.Последовательные срезы окрашивания HE и TUNEL сравнивали с визуализацией апоптотических клеток между мышами Smg GDS — / — и контрольными однопометниками. Хотя несколько пикнотических ядер и TUNEL-положительных клеток наблюдались в кардиомиоцитах контрольных и Smg GDS — / — эмбрионов при 18,5 dpc (наши неопубликованные результаты), массивная гибель клеток была обнаружена при окрашивании TUNEL Smg GDS — / — сердца в день рождения, а именно через 6 часов после рождения, по сравнению с Smg GDS +/- контрольной группой однопометников (рисунок, Ca и Da). Дегенеративные изменения преобладали в эндокарде левого желудочка (рисунок, Dc и Dd), что приводило к отслоению кардиомиоцитов и расширению камер желудочков.Интересно, что апоптотические клетки были обнаружены в обоих желудочках сердца Smg GDS — / -, тогда как они были локализованы исключительно в правом желудочке сердца Smg GDS +/- (рисунок, Cb и Db) и контроля дикого типа (наш неопубликованные результаты). Эти данные свидетельствуют о том, что апоптоз в правой части сердца является частью физиологического процесса, отражающего перегрузку давлением, вызванную сердечно-сосудистым кризом в неонатальном периоде.

    Затем мы протестировали пролиферацию эмбриональных кардиомиоцитов in vivo, поскольку сердечные поражения у мышей Ki-Ras — / — наблюдались в 13 лет.5–15,5 dpc и считается вызванным дефектным разрастанием сердечной мышцы. Беременным мышам с эмбрионами 11,5 dpc внутрибрюшинно вводили BrdU, и гистохимически оценивали включение BrdU в ткани эмбриона. Срезы сердца не показали очевидных различий по окрашиванию HE (рисунок, Aa и Ba) между мышами Smg GDS — / — и контрольными. Количественное сравнение ядер S-фазы (BrdU-позитивных) относительно общего количества ядер кардиомиоцитов в сердцах Smg GDS +/– и Smg GDS — / — (данные, собранные при исследовании 32 срезов от четырех эмбрионов) выявило показатель 22.2 ± 3,3% для сердец Smg GDS +/- и 21,3 ± 3,7% для сердец Smg GDS — / -, демонстрируя, что BrdU был включен на почти одинаковых уровнях как в Smg GDS — / -, так и в контрольном сердце (рисунок, Ab и Bb). . Для дальнейшего анализа дифференцировки сердечных мышц мы выделили мРНК из эмбриональных сердец при 17,5 дпк и выполнили ОТ-ПЦР для обнаружения экспрессии генов MLC-1A, -1V и -2V (Рисунок C). Не было различий между уровнями продуктов ОТ-ПЦР, полученных из сердец Smg GDS +/– и Smg GDS — / -.Эти результаты согласуются с результатами иммуноокрашивания с использованием антител против MLC-2V (наши неопубликованные результаты). Наконец, мы проанализировали первичные культуры эмбриональных кардиомиоцитов при 13,5, 14,5 и 16,5 dpc, но не смогли обнаружить никаких изменений в организации α-актинина в саркомерные единицы, маркер созревания кардиомиоцитов (наши неопубликованные результаты). Эти результаты указывают на то, что кардиомиоциты пролиферируют и дифференцируются нормально во время эмбриогенеза мышей Smg GDS — / -, что согласуется с профилями менделевского генотипа эмбрионов, возникающих в результате гетерозиготных межкрозовых переходов Smg GDS.

    Нормальная пролиферация и дифференцировка кардиомиоцитов в Smg GDS — / — сердце. Показаны поперечные сечения сердца эмбрионов с разрешением 11,5 dpc. (Aa и Ba) ОН окрашивание сердца Smg GDS +/- (Aa) и сердца Smg GDS — / — (Ba). (Ab и Bb) Включение BrdU в пролиферирующие кардиомиоциты измеряли иммуногистохимическим анализом. Срезы эмбрионов Smg GDS +/- (Ab) и Smg GDS — / — (Bb) при 13,5 dpc окрашивали BrdU-специфическим антителом и оценивали BrdU-положительные клетки на поле.(C) Продукты ОТ-ПЦР, полученные из мРНК сердца Smg GDS +/- и Smg GDS — / — при 11,5 dpc, подвергали электрофорезу и окрашивали бромистым этидием. Праймеры были специфичны для генов MLC-1A, -1V и -2V.

    Апоптоз неонатальных тимоцитов и развивающихся нейрональных клеток у мышей Smg GDS — / —

    Помимо поражения сердца, мы обнаружили, что тими мышей Smg GDS — / — через 1 день после рождения были заметно меньше, чем у мышей дикого типа. type или Smg GDS +/- в контроле из потомства с общим числом тимоцитов, сниженным от ~ 5 до 10 раз.Гистологические срезы Smg GDS — / — thymi показали широкое распространение пикнотических ядер с консервативными структурами коры и продолговатого мозга (рисунок, Aa, Ab, Ba и Bb). Поскольку обильные пикнотические ядра указывают на апоптоз, мы выполнили окрашивание TUNEL и обнаружили, что апоптотические тимоциты действительно были увеличены в Smg GDS — / — тимусе (рисунок, Ac и Bc). Чтобы подтвердить, приводит ли дефицит Smg GDS к блоку созревания тимоцитов, Smg GDS — / — тимоциты анализировали с помощью проточной цитометрии.Тем не менее, профили популяции CD4- и CD8-положительных клеток были в пределах нормы (наши неопубликованные результаты), что позволяет предположить, что Smg GDS по существу не требуется для дифференцировки Т-клеток.

    Усиленный апоптоз в Smg GDS — / — тимусе через 1 день после рождения и повышенная гибель нейрональных клеток у Smg GDS — / — эмбриона. (Aa и Ba) Срезы вилочковой железы дикого типа (Aa) и Smg GDS — / — вилочковой железы (Ba) получали из мышей из однопометного помета и окрашивали HE (20 ×). Тимус Smg GDS — / — был втрое меньше вилочковой железы дикого типа.(Ab и Bb) Окрашивание вилочковой железы дикого типа (Ab) и Smg GDS — / — вилочковой железы (Bb) при высоком увеличении (200 ×). В тимоцитах Smg GDS — / — были обнаружены многочисленные пикнотические ядра по сравнению с тимоцитами дикого типа. (Ac и Bc) Окрашивание TUNEL вилочковой железы дикого типа (Ac) и Smg GDS — / — вилочковой железы (Bc). TUNEL-положительные тимоциты были увеличены в Smg GDS — / — тимусе. (Ca и Cb) Поперечные срезы третьего желудочка и промежуточного мозга эмбриона Smg GDS — / — на 12,5 dpc. (Ca) Окрашивание головного мозга Smg GDS — / — HE (20 ×).(Cb) TUNEL-окрашивание мозга Smg GDS — / — (20 ×). (Cc – F) Большое увеличение (200 ×). TUNEL-положительные нейрональные клетки были увеличены в продолговатом мозге (Cc; заключены в рамки Ca и Cb), ганглиях тройничного нерва (D), спинном мозге (E) и ганглиях задних корешков (F).

    Нозерн-блот-анализ показал, что мРНК Smg GDS экспрессируется преимущественно в головном мозге, а анализ гибридизации in situ показал, что транскрипты Smg GDS экспрессируются в продолговатом мозге, ганглиях тройничного нерва и ганглиях задних корешков эмбрионов в 18 лет.5 dpc (наши неопубликованные результаты). Кроме того, повышенные уровни апоптоза наблюдались у мышей с дефицитом Ki-Ras во время эмбрионального развития нервной системы (Koera et al. , 1997). Чтобы определить, можно ли объяснить влияние дефицита Smg GDS на нейрогенез в контексте функциональной ассоциации с Ki-Ras, мы проанализировали потенциальные поражения центральной нервной системы у Smg GDS — / — эмбрионов. Хотя никаких грубых структурных аномалий не наблюдалось в Smg GDS — / — головном мозге, пикнотические ядра были обнаружены в продолговатом мозге (Рисунок Ca) и спинном мозге в 12.5 dpc. Затем мы выполнили окрашивание TUNEL, чтобы сравнить степень гибели клеток, и обнаружили, что количество апоптотических клеток увеличивалось в продолговатом мозге (рис. Cb и Cc), ганглиях тройничного нерва, спинном мозге и ганглиях задних корешков по сравнению с контрольными однопометниками (рис. , D – F). Поскольку считается, что значительный уровень апоптоза имеет важное значение для определения цитоархитектуры мозга, трудно оценить патологическое значение этих апоптотических изменений, очевидно не способных вызвать эмбриональную летальность.С другой стороны, мы не смогли обнаружить усиленный апоптоз в печени плода, в котором был нарушен гематопоэз, у мышей с нокаутом Ki-Ras (Johnson et al. , 1997). Результат можно объяснить различием генетического фона, поскольку мы использовали ту же линию ES-клеток и мышей BDF для скрещивания, что и у Koera et al. (1997), но не Johnson et al. (1997). Однако примечательно, что эмбриональные стадии этих апоптотических нейрональных клеток и распределение апоптотических повреждений в нервной системе совпадают с таковыми, наблюдаемыми у мышей с дефицитом Ki-Ras.

    Апоптоз культивируемых Smg GDS — / — тимоцитов в ответ на этопозид и УФ-облучение

    Для изучения взаимосвязи между дефицитом Smg GDS и повышенным апоптозом мы использовали культивированные Smg GDS — / — тимоциты, которые более подходят, чем Smg GDS- / — кардиомиоциты и нейрональные клетки для различных анализов апоптоза ex vivo. Smg GDS — / — и контрольные тимоциты выделяли из новорожденных мышей и обрабатывали четырьмя стимулами, которые, как известно, индуцируют апоптоз. Степень апоптоза измеряли по активности расщепления каспазы-3, которая является прямым активатором дезоксирибонуклеаз, ответственных за фрагментацию ДНК во время апоптоза (Liu et al., 1997; Enari et al. , 1998). Хотя дексаметазон и антитело против Fas не оказали значительного влияния на Smg GDS — / — и контрольные тимоциты (рисунок, A и B), активность каспазы-3 увеличивалась в 3-4 раза этопозидом и УФ-облучением в Smg GDS — / — тимоцитов по сравнению с контролем из однопометного помета (Рисунок, C и D). Поскольку оба стимула индуцируют пути ответа на повреждение ДНК (Lowe et al. , 1993a, b), Smg GDS, вероятно, участвует в остановке роста и апоптозе в сочетании с функцией контрольной точки p53 в клетках млекопитающих.

    Активность расщепления каспазы-3 при определенном апоптозе тимоцитов мышей в день рождения. Тимоциты мыши обрабатывали в течение 2 часов дексаметазоном (A), мышиным моноклональным антителом Fas (B) и этопозидом (C) для индукции апоптоза в указанных концентрациях. Клетки также обрабатывали в течение указанного времени (h) УФ-облучением (D). Активность каспазы-3 измеряли как относительную интенсивность флуоресценции, основанную на расщеплении флуорогенного субстрата ацетил-аспартил-глутамил-валиласпарт-1-альдегид-7-амино-4-трифторметил кумарина.Показаны активности каспазы-3 в тимоцитах Smg GDS +/- (светлые кружки) и тимоцитах Smg GDS — / — (темные квадраты). Необработанные клетки были в основном отрицательными на присутствие активной каспазы-3.

    Спасение апоптоза, индуцированного этопозидом, с помощью Smg GDS, экзогенно экспрессируемого в Smg GDS — / — тимоцитах

    Чтобы доказать, что дефицит Smg GDS на самом деле ответственен за апоптотический фенотип у мышей, мы попытались спасти некоторые свойства Smg GDS- / — мыши путем преобразования функции Smg GDS. Мы спросили, сможет ли экспрессия кДНК Smg GDS преодолеть апоптоз Smg GDS — / — тимоцитов, вызванный этопозидом.Соответственно, мы выделили первичные тимоциты Smg GDS +/- и Smg GDS — / — от новорожденных мышей в день рождения, трансфицировали их векторами, экспрессирующими Smg GDS или EGFP в качестве контроля, и далее культивировали при слиянии в течение следующих 24 часов. Затем клетки обрабатывали этопозидом в течение 4 ч для запуска апоптоза; Профили проточной цитометрии и активность каспазы-3 были проанализированы как признаки апоптоза. В репрезентативном эксперименте процент выживания тимоцитов Smg GDS +/- и Smg GDS — / -, трансфицированных одним пустым вектором, составлял 61 и 42% соответственно (Рисунок A, левые панели).Эти профили проточной цитометрии показывают, что тимоциты Smg GDS — / — более чувствительны к этопозиду, чем тимоциты Smg GDS +/-, что в основном согласуется с описанными результатами анализа каспазы-3 (Рисунок C). Однако трансдукция Smg GDS перед лечением этопозидом увеличивала процент выживших Smg GDS — / — тимоцитов, как отрицательных по аннексину V, так и иодиду пропидия, с 42 до 55% с реципрокным снижением количества апоптотических клеток, положительных по аннексину V и пропидию. йодида от 27 до 15% (рисунок А, нижние панели).Напротив, тимоциты Smg GDS +/-, трансфицированные векторами, экспрессирующими Smg GDS (рис. A, верхние панели) и EGFP (наши неопубликованные результаты), не показали значительного влияния на процент выживших клеток, как отрицательных по аннексину V и йодиду пропидия, при аналогичные уровни 61–62%.

    Спасение апоптоза, вызванного этопозидом, с помощью кДНК Smg GDS, экзогенно экспрессируемой в Smg GDS — / — тимоцитах. (A) Культуры 1 × 10 6 тимоцитов, полученных от новорожденных мышей Smg GDS +/- (верхние панели) и Smg GDS — / — (нижние панели), трансдуцировали пустым ретровирусным вектором pLNCX (левые панели) и трансдуцировали с помощью pLNCX, экспрессирующего КДНК Smg GDS (правые панели).Затем обработанные ретровирусом тимоциты стимулировали в течение 4 часов этопозидом для индукции апоптоза, окрашивали йодидом пропидия и аннексином V-FITC и анализировали проточной цитометрией. Процент от общего количества проанализированных закрытых клеток указан на панелях. (B) Активность каспазы-3 определяли, как показано на рисунке. Средние значения показаны для пяти независимых экспериментов с Smg GDS +/- и Smg GDS — / — тимоцитами после обработки пустым ретровирусным вектором pLNCX (открытые прямоугольники) и pLNCX, экспрессирующим кДНК Smg GDS (заштрихованные прямоугольники), и обработки этопозидом в течение 4 часов.

    Кроме того, восстановление дефицита Smg GDS наблюдалось с помощью каспазы-3 активности Smg GDS — / — тимоцитов после того же ретровирусного заражения (Рисунок B). Трансдукция Smg GDS в тимоциты до обработки этопозидом снижала уровни активности каспазы-3, особенно в Smg GDS — / — тимоцитах, но не в контроле. Показаны средние значения репрезентативных случаев пяти независимых экспериментов. То, что активность каспазы-3 варьируется в зависимости от препаратов тимоцитов, может отражать противоречивую степень апоптотических состояний в тимоцитах in vivo.Анализ каспазы-3 оказался более чувствительным, чем анализ проточной цитометрии, для определения степени восстановления дефицита Smg GDS. Это различие, вероятно, можно объяснить тем наблюдением, что популяция апоптотических клеток, которые уже утратили активность каспазы-3, исключаются из анализа каспазы-3, но не из анализа проточной цитометрии. Поскольку активность каспазы-3 была нормализована по количеству общего белка, этот анализ должен отражать состояние живых клеток на ранних стадиях апоптоза.Напротив, сортировка клеток, активируемая флуоресценцией, включает клетки на каждой стадии апоптоза, то есть даже мертвые клетки, что может снизить чувствительность к обнаружению эффекта трансдукции Smg GDS. Взятые вместе, эти данные свидетельствуют о том, что Smg GDS эффективен в снижении апоптоза, вызванного этопозидом.

    ОБСУЖДЕНИЕ

    Совместное участие факторов окружающей среды и дефицит Smg GDS в апоптозе

    Патологический механизм, лежащий в основе фенотипа Smg GDS — / — мышей, по-видимому, усиливается апоптозом по крайней мере в трех типах клеток.Дефицит Smg GDS делает клетки восприимчивыми к стимулам, запускающим апоптоз, но не всем Smg GDS — / — клеткам суждено умереть. Апоптоз кардиомиоцитов вызвал сердечную недостаточность почти у 70% новорожденных мышей Smg GDS — / -, в то время как 30% из них оставались жизнеспособными. Соответственно, апоптоз тимоцитов или нейрональных клеток не приводил к явным нарушениям, таким как аномальное созревание Т-клеток или гибель эмбрионов. Следовательно, вполне вероятно, что факторы окружающей среды запускают апоптоз, вызывая патологические поражения.

    Важно, что неонатальный период является единственной критической точкой в ​​продолжительности жизни Smg GDS — / — мышей. Что касается Smg GDS — / — кардиомиоцитов, гемодинамические изменения во время перехода от фетального к системному кровообращению, вероятно, будут стрессом окружающей среды, который запускает апоптоз и завершается морфологическими изменениями и сердечной недостаточностью. Известно, что закрытие артериального протока вызывает внезапное увеличение постнагрузки левого желудочка, что может объяснить внезапное появление апоптотических событий в Smg GDS — / — кардиомиоцитах.Сердце дикого типа обычно восстанавливается после локальных повреждений, тогда как некоторые из сердец Smg GDS — / — не переносят эти стрессы. Это мнение согласуется с недавним сообщением, демонстрирующим, что биомеханический стресс запускает апоптоз кардиомиоцитов у мышей, лишенных рецептора цитокина gp130 (Hirota et al. , 1999). Что касается Smg GDS — / — тимоцитов, возможными стрессами окружающей среды могут быть гипоксия, вызванная сердечной недостаточностью, и несоответствующие реакции на сигналы роста или выживания in vivo.Обработка тимоцитов ex vivo индукторами апоптоза, однако, ясно продемонстрировала, что некоторые генотоксические агенты, такие как этопозид и УФ-облучение, были эффективны, что предполагает участие зависимого от повреждения ДНК пути апоптоза в условиях дефицита Smg GDS. Наконец, анализ Smg GDS — / — эмбрионов выявил дефекты только в развитии нейронов; Апоптотическая гибель клеток была обнаружена во вновь образованных постмитотических нейронах. Хотя биологическое событие, запускающее Smg GDS — / — гибель нейрональных клеток, трудно определить, интересно, что дефицит Smg GDS и Ki-Ras приводит к сходным дефектам развития нейронов.

    Фенотип Smg GDS — / — мышей может включать пролиферативные и дифференцированные дефекты, за исключением усиленного апоптоза. Однако мы показали, что Smg GDS — / — кардиомиоциты пролиферируют и дифференцируются нормально, что было проанализировано по включению BrdU и по экспрессии MLC и α-актинина. Дифференциация тимоцитов не была нарушена при анализе проточной цитометрией с использованием антител к CD4 и CD8. Более того, первичные эмбриональные фибробласты мыши, лишенные Smg GDS, демонстрируют нормальную пролиферативную способность в культуре; Активность MAPK повышалась до того же уровня, что и у эмбриональных фибробластов мыши дикого типа при обработке эпидермальным фактором роста (M.Танака, неопубликованное наблюдение). Т.о., факторы окружающей среды и дефекты сигналов выживания клеток, но не дефекты сигналов пролиферации и дифференцировки, скорее всего, кооперируются, чтобы генерировать фенотип Smg GDS — / — мышей.

    Молекулярные механизмы Smg GDS-опосредованной передачи сигналов выживания in vivo

    Smg GDS структурно и кинетически отличается от других GEP для подсемейств Ras и Rap (McCrea et al. , 1991; Mizuno et al. , 1991; Kotani et al., 1992; Кавамура и др. , 1993; Orita et al. , 1993; Nakanishi et al. , 1994). На основании биохимических свойств мы предложили следующие роли Smg GDS и Cdc25 в Ki-Ras. Ki-Ras в основном активируется действием Cdc25 на цитоплазматическую поверхность плазматической мембраны. Связанная с GTP форма Ki-Ras затем образует комплекс с Smg GDS и передается из комплекса в его расположенные ниже по ходу цепи молекулы-мишени, такие как c-Raf-1 и B-Raf. Как только GTP-связанная форма Ki-Ras образует комплекс со своими молекулами-мишенями, Smg GDS отделяется от Ki-Ras и повторно используется для другого цикла транслокации Ki-Ras (Takai et al., 1993).

    Хотя неясно, какие члены семейств Ras, Rho и Rap являются естественными мишенями для Smg GDS in vivo, несколько ключей позволяют предположить, что дисфункция Ki-Ras, скорее всего, участвует в генерации фенотипа Smg GDS- / — мыши. Во-первых, недавно было сообщено, что Ras1 обеспечивает передачу сигналов выживания клеток у беспозвоночных (Bergmann et al. , 1998b). Биохимически Ras1 подавляет экспрессию Hid для выживания в Drosophila (Bergmann et al., 1998а; Курада и Уайт, 1998). Кроме того, Ras-опосредованная фосфатидилинозитол-3-киназа ингибирует апоптоз, индуцированный c- myc (Kauffmann-Zeh et al., 1997), а фосфатидилинозитол-3-киназа активирует Akt для доставки антиапоптотических сигналов (Kennedy14 et al. , 1997; Eves et al. , 1998). Таким образом, у млекопитающих Ki-Ras может быть антиапоптотическим преобразователем, который служит для защиты клетки от различных генотоксических стрессов и стрессов окружающей среды, включая повреждение ДНК, гипоксию и несоответствующие сигналы роста.Во-вторых, есть несколько сходств между фенотипами мышей Smg GDS — / — и Ki-Ras — / -. Гистопатология сердца показала характерный паттерн гипоцеллюлярности миокарда как у Smg GDS — / -, так и у Ki-Ras — / — мышей, а повышенная гибель нейрональных клеток имела общий временной и пространственный паттерн распределения у обоих мутантных эмбрионов, хотя развитие тимоцитов плода кажется нормальным у мышей Ki-Ras — / -. В-третьих, Smg GDS демонстрирует активность обмена GDP / GTP только в отношении Ki-Ras среди трех белков Ras in vitro (Mizuno et al., 1991), тогда как исследования на мышах с нокаутом показали, что для жизнеспособности мышей по существу требуется только Ki-Ras, но не H-Ras и N-Ras (M. Katsuki, личное сообщение; Umanoff et al. , 1995; Johnson и др. , 1997; Koera и др. , 1997). Взятые вместе, мы предполагаем, что дефицит Smg GDS может быть легкой формой дефицита Ki-Ras и что апоптотический фенотип почти наверняка является результатом отсутствия общих функций Ki-Ras и Smg GDS.

    Тем не менее, мы не исключили возможность того, что дисфункция Rho или Rac участвует в генерации апоптотического фенотипа, особенно в тимусе.Выживаемость тимоцитов нарушается у трансгенных мышей, лишенных функционального Rho, из-за нацеливания на тимус трансгена, кодирующего трансферазу C3 из Clostridium botulinum (Henning et al. , 1997). Недавно сообщалось, что инактивация RhoA, но не Rac1 или Cdc42, вызывает апоптоз в клетках почек детенышей хомячка (Moorman et al. , 1999), а Rac1, как сообщается, проявляет антиапоптотический эффект в интерлейкин-3-зависимых клетках. мышиные кроветворные клетки BaF3 (Nishida et al., 1999). Следовательно, дефекты Smg GDS — / — вилочковой железы могут быть объяснены повышенным апоптозом, вызванным дисфункцией Rho или Rac, но не дисфункцией Ras. Кроме того, сообщалось, что гомолог Smg GDS в Dictyostelium , названный Darlin, необходим для способности клеток к агрегации в ответ на голодание, но не важен для цитокинеза или развития (Vithalani et al. , 1998). Поскольку Darlin связывается с белками слияния глутатиона S -трансферазы RacE, RacC и Cdc42Hs, взаимодействие Darlin с белками семейства Rho может быть важным для выживания клеток, но не для клеточного деления.Таким образом, еще предстоит определить, действительно ли малые G-белки, отличные от Ki-Ras, обладают антиапоптотической функцией у мышей.

    Апоптоз в Smg GDS — / — тимоцитах, индуцированный этопозидом и УФ-облучением, предполагает участие зависимого от повреждений пути апоптоза в отсутствие функции Smg GDS. Апоптоз, зависимый от повреждений ДНК, эволюционно хорошо сохраняется от беспозвоночных до млекопитающих по сравнению с апоптозом, индуцированным Fas (Meier and Evan, 1998). Поскольку роль p53 в путях повреждения ДНК широко исследовалась (Harvey et al., 1993; Lowe et al. , 1993; Deng et al. , 1995; Kamijo et al. , 1997), мы выдвинули гипотезу о том, что сигналы выживания клеток стимулируют Smg GDS для активации Ki-Ras, а Ki-Ras по сравнению с p53 действует как баланс в регуляции передачи сигналов против апоптоза и выживания и апоптоза.

    -Guangzhou Dongsheng Biotech

    Содержание

    Описание

    Набор для экстракции геномной ДНК дрожжей представляет собой простой и быстрый метод высококачественной очистки геномной ДНК от дрожжей.В системе геномной ДНК дрожжей используется технология мембран из силикагеля для простого и быстрого выделения геномной ДНК без фенола / хлороформа. Гомогенизация не требуется, так как ткани непосредственно лизируются протеиназой К. Буферная система оптимизирована для селективного связывания ДНК с силикагелевой мембраной. Простой протокол центрифугирования полностью удаляет загрязнители, такие как белки, двухвалентные катионы и вторичные метаболиты. Затем чистая ДНК элюируется водой или буфером с низким содержанием соли, готовая к использованию.Типичный выход геномной ДНК составляет 3-25 мкг из 1–5 х 107 дрожжевых клеток. Очищенная геномная ДНК с высоким молекулярным весом подходит для прямого использования во всех распространенных приложениях молекулярной биологии: ПЦР, рестрикционное расщепление, клонирование, секвенирование ДНК и Саузерн-блот-анализ.


    Характеристики


    Эффективность: 3–35 мкг геномной ДНК из 1–5 x 107 дрожжевых клеток.
    Пост: Процедура занимает всего 1 час.
    Безопасно: без стадии экстракции фенолом / хлороформом.
    Высокая чистота: очищенная ДНК готова для последующего применения, такого как ПЦР, рестрикционное расщепление.

    Последующие приложения


    Очищенная ДНК не содержит примесей и ингибиторов ферментов и обычно имеет соотношение A260 / A280 от 1,7 до 1,9 и подходит для таких приложений, как:

    ü Рестрикционное расщепление

    ü ПЦР

    ü Маркировка

    ü Строительство библиотеки


    Хранение


    Хранение протеина К при -20 ℃, другие реагенты могут храниться при комнатной температуре до 1 года.Любой осадок в растворе DS и растворе MS можно повторно растворить, инкубируя при 37 ° C перед использованием.


    Важные примечания


    • Перед первым использованием набора разбавьте промывочный буфер (PE) этанолом (96-100%):

    90 мл


    N1161 (50preps)

    N1162 (100preps)

    Промывочный буфер (PE)

    15 мл

    30 мл

    Этанол

    Общий объем

    60 мл

    120 мл

    После добавления этанола установите флажок на бутылке, чтобы указать завершенный этап.
    • Проверяйте раствор на наличие осадков перед каждым использованием. Повторно растворите осадок, нагрея раствор до 37 ° C и охладив до 25 ° C.
    • Все стадии очистки следует проводить при комнатной температуре.

    Протокол

    1. Добавьте 1-5 мл дрожжевой культуры (не более 5 x 107 клеток) в 1,5 мл микроцентрифужную пробирку. Центрифуга при 12000 об / мин в течение 12 мин для осаждения клеток. Удалите супернатант.

    2. Добавьте 600 мкл литиказного буфера и 200 ед. Литиказы, тщательно перемешайте встряхиванием, инкубируйте при 30 ℃ в течение 30 минут.
    Примечание. Литиказу должен поставлять пользователь или ее можно получить в компании Dongsheng Biotech (№ по каталогу N9031 / N9032)

    3. Центрифуга при 5000 об / мин в течение 8–10 минут для осаждения смеси. Поместите супернатант. Добавьте к осадку 200 мкл раствора DS. Важно, чтобы образец и раствор DS были немедленно и тщательно перемешаны встряхиванием или пипетированием до получения гомогенного раствора.
    Необязательно Если требуется геномная ДНК без РНК, добавьте 4 мкл РНКазы A (100 мг / мл) и инкубируйте в течение 5 минут при комнатной температуре.РНКазу А (100 мг / мл) можно приобрести отдельно.

    4. Добавьте 20 мкл протеиназы K и 220 мкл раствора MS. Тщательно перемешайте встряхиванием. Инкубируйте при 65 ° C в течение 10 минут до получения гомогенного раствора. Прокрутите водяные бусинки на стенке трубки.

    5. Добавьте к образцу 220 мкл этанола (96–100%) и тщательно перемешайте встряхиванием. Важно тщательно перемешать образец и этанол. Может появиться осадок. Пипетируйте смесь, полученную на этапе 4, в спин-колонку, помещенную в пробирку для сбора на 2 мл (входит в комплект).Центрифуга при 12000 об / мин в течение 1 мин. Отказаться от проточного.

    6. Добавьте 500 мкл промывочного буфера PS и центрифугируйте в течение 1 мин при 12000 об / мин. Удалите проточный поток.

    7. Добавьте 500 мкл промывочного буфера PE и центрифугируйте в течение 1 мин при 12000 об / мин. Отказаться от проточного. Повторите шаг 6 еще раз.

    8. Центрифуга в течение 3 мин при 12000 об / мин для сушки мембраны колонки. Выбросьте проточную и сборную трубку. №
    Примечание. Важно высушить мембрану спин-колонки, поскольку остаточный этанол может помешать последующим реакциям.Этот этап центрифугирования гарантирует, что во время следующего элюирования не будет уноситься остаточный этанол. После этапа центрифугирования осторожно извлеките спин-колонку, чтобы колонка не соприкасалась с проточным потоком, так как это приведет к уносу этанола. . Если происходит унос этанола, опорожните пробирку для сбора, затем повторно используйте ее для другого центрифугирования в течение 1 мин при 12 000 об / мин.

    9. Поместите спин-колонку в чистую микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл (не входит в комплект) и нанесите пипеткой 30–100 мкл буфера для элюента AE (предварительно нагретого до 65 ℃) непосредственно на мембрану.Инкубируйте при комнатной температуре в течение 2 минут, а затем центрифугируйте в течение 2 минут при 12000 об / мин для элюирования. Пробирка содержит очищенную ДНК. Храните ДНК при -20 ℃.

    Июнь Лаборатория | qBio | UCSD Физика и молекулярная биология

    Материнская машина

    На этой странице вы можете найти полный чертеж и руководство пользователя для материнской машины, простого микрожидкостного устройства для непрерывного культивирования, разработанного в нашей лаборатории. Уже в 1950-х годах Копенгагенская школа физиологии роста бактерий строго и количественно продемонстрировала важность условий сбалансированного роста, среди прочего, для получения воспроизводимых результатов.В настоящее время наблюдается возобновление интереса к росту, особенно со стороны исследователей из количественных наук, и мы надеемся, что исследователи в этой области будут использовать в своих экспериментах материнскую машину или другие устройства, которые обеспечивают стабильные условия роста.

    Использование таких устройств, как материнская машина, дает несколько преимуществ. (1) обеспечиваются условия сбалансированного роста (2) можно изменять / контролировать условия буфера (3) высокая пропускная способность (мы обычно собираем десятки миллионов точек данных) (4) наблюдения на уровне одной ячейки (5) длительные- срочные наблюдения (сотни поколений) (6), совместимые с вашей любимой оптикой / микроскопией.

    Еще одна причина для публикации руководства в Интернете заключается в том, что мы видели, как многие студенты и постдоки изобретают колеса заново, особенно когда они только начинают изучать новые вещи, потому что важные детали не включены в литературу. Веселиться!

    Ссылку можно найти здесь и в нашем разделе публикаций. Файлы находятся здесь:

    Полные наборы данных из Wang et al, Curr Biol 20 , 1099-1103 (2010)

    Справочник по материнской машине (24 ноября 2010 г.)

    Файл L-EDIT, содержащий дизайн маски (версия 2009 г.)

    AutoCAD (.формат gds) версия

    Полные наборы данных из Taheri-Araghi et al, Curr Biol 25 (3), 385–391, 2015

    Код анализа материнской машины на Python


    См. Также:

    Контроль размера клеток и гомеостаз у бактерий
    S.Taheri-Araghi, S. Bradde, JT Sauls, NS Hill, PA Levin, J. Paulsson, M. Vergassola, and S. Jun
    Current Biology 25 (3), 385–391, 2015
    [онлайн] [PDF + расширенный SI] [Google Scholar] [новости]
    Поддержание размера клеток: раскрыта универсальная стратегия
    С. Джун и С. Тахери-Араги
    Тенденции в микробиологии 23 (1), 4–6, 2015
    [онлайн] [PDF] [Google Scholar]

    Учебная программа — Генетика и геномные науки

    Наша учебная программа предоставляет студентам всестороннюю подготовку в области генетики, геномики и вычислительной биологии.Наша учебная программа начинается с гибких вариантов курса, которые дают студентам первого курса возможность получить знания и навыки, соответствующие их научным интересам. Это включает в себя возможность пройти дополнительные курсы по выбору во многих областях, включая биомедицинскую информатику, биостатистику, биологию рака, развитие, иммунологию, микробиологию, неврологию, фармакологию и терапевтический дизайн, а также регенерацию и стволовые клетки. В течение первого года обучения студенты одновременно выполняют короткие ротационные проекты в 2–3 лабораториях, чтобы найти лабораторию, в которой они будут размещать свою диссертацию.Выбрав диссертационную лабораторию в конце 1-го года, во 2-м году студенты проходят дополнительные факультативные курсы, участвуют в наших еженедельных семинарах и журнальных клубах, предлагают диссертационный проект и собирают диссертационный комитет из 4-5 преподавателей. После завершения экзамена на тезисы на 2-м, 3-м и последующих курсах студенты сосредотачиваются на своих исследованиях, продолжая участвовать в наших еженедельных семинарах и журнальных клубах. В течение этих лет студенты регулярно встречаются со своими диссертационными комитетами, чтобы получить отзывы и советы.Для завершения программы каждый студент должен сдать дипломный экзамен.

    Требования:

    • Курсовые работы по биомедицине, генетике и науке о данных
    • Участие в наших еженедельных семинарах и журнальных клубах
    • 2-3 смены лаборатории по 8-10 недель
    • Дипломная работа
    • Защита диссертации

    Требования к курсу:

    • Введение в биомедицинскую науку (6 кредитов). Два имеют вариант двух треков:
      • Описательный трек — BSR 1012: Биомедицинские науки I и BSR 1013: Биомедицинские науки II
      • Количественный трек — BSR 1800: Системная биомедицина и BSR 1802: Количественная физиология выпускников
    • Введение в статистику (3 кредита): Студенты могут выбирать из нескольких классов, включая
      • BIO 6400: Биостатистика для биомедицинских исследований
      • BSR 1026: Прикладная биостатистика для биомедицинских исследований
      • MPH 0300: Введение в биостатистику.
    • Элективные курсы по генетике, геномике или науке о данных (3 кредита). Доступны многочисленные варианты, включая курсы, перечисленные ниже, а также курсы, предлагаемые Центром выпускников CUNY, Инженерной школой CUNY Grove и Cooper Union.
      • Генетика и геномика
        • BSR 2301: Гены и развитие эмбрионов
        • BSR 2400: Трансляционная геномика
        • BSR 2401: Введение в секвенирование генома человека
        • BSR 6203: Практическая геномика рака
        • BSR 6302: Системная биология и биология развития и врожденные пороки
        • BSR 6402: Практический анализ личного генома
        • CLR 0007: Методы клинических исследований: генетика / геномика
        • CLR 0801: Основы молекулярной биологии и генетики
        • CLR 0810: Генетическая эпидемиология
        • MGC 1400: Медицинская генетика
      • Наука о данных
        • BIO 6300: Введение в R
        • BIO 8200: Анализ категориальных данных
        • BIO 8700: Теория линейных и обобщенных линейных моделей
        • BMI 1007: Компьютерные системы — Python
        • BMI 2002: Биомедицинская разработка программного обеспечения I
        • BMI 2005: Введение в алгоритмы
        • BMI 3001: Анализ и добыча данных
        • ИМТ 3002: машинное обучение
        • BSR 1800: Загрузочная карта MATLAB
        • BSR 1803: Системная биология — биомедицинское моделирование
        • MPH 0812: Прикладные линейные модели
        • MPH 0821: Анализ продольных данных
        • MPH 0822: прикладные линейные модели II
    • Дополнительные элективные курсовые работы (3 кредита) в любой области биомедицины или науки о данных.Доступны многочисленные варианты, включая курсы, перечисленные выше.
    • Этика исследований (1 балл). Все студенты должны посещать эти два класса:
      • BSR 1021: Ответственное проведение исследований
      • BSR 1022: строгость и воспроизводимость

    Типовой график курса

    Год 1-

    Осень
    Номер курса Название курса Кредиты
    BSR 1012 или BSR 1800 Биомедицинские науки I или системная биомедицина 3
    Элективный курс по генетике, геномике или науке о данных 3
    BMI 1007, BSR 1800 или BIO 6300 Python, учебный курс MATLAB или введение в R 1
    BSR 1021 Ответственное проведение исследований 0.5
    BSR 1006 Вращение лаборатории 4

    Год 1-

    Пружина
    Номер курса Название курса Кредиты
    BSR 1013 или BSR 1802 Биомедицинские науки II или количественная аспирантура 3
    BSR 1026 Прикладная биостатистика для биомедицинских исследований 3
    BSR1022 Жесткость и воспроизводимость 0.5
    BSR 1007 Вращение лаборатории 4

    Год 2-

    Осень
    Номер курса Название курса Кредиты
    Элективный курс 3
    BSR 4401 Журнал «Клуб генетики и данных» 1
    BSR 5401 Семинары по генетике и науке о данных 1
    BSR 5402 Выполняется работа: генетика и наука о данных 1
    БСР 8000 Независимое исследование 10

    Год 2-

    Пружина
    Номер курса Название курса Кредиты
    BSR 4401 Журнал «Клуб генетики и данных» 1
    BSR 5401 Семинары по генетике и науке о данных 1
    BSR 5402 Выполняется работа: генетика и наука о данных 1
    БСР 8000 Независимое исследование 10

    Год 3 и позже

    Номер курса Название курса Кредиты
    БСР 9000 Докторская диссертация 8
    BSR 4401 Журнал «Клуб генетики и данных» 1
    BSR 5401 Семинары по генетике и науке о данных 1
    BSR 5402 Выполняется работа: генетика и наука о данных 1

    Журнальные клубы и семинары

    Начиная со второго года обучения, студенты должны участвовать в еженедельных семинарах GDS, рабочих совещаниях и клубах журналов.

    Кроме того, у студентов есть возможность участвовать во многих дополнительных семинарах и журнальных клубах, организованных конкретными институтами и центрами на Синае. Ниже приведены некоторые из самых популярных семинаров среди наших студентов.

    Лабораторные вращения

    Студенты выполняют 2-3 смены лаборатории по 8-10 недель, работая в лаборатории в среднем 20 часов в неделю. Цель этой ротации — дать студентам возможность исследовать свои научные интересы, получить новые навыки и знания, а также изучить потенциальные принимающие лаборатории для их диссертации.

    Экзамен на диссертацию

    Студенты должны сдать экзамен на диссертацию на втором курсе. Экзамен состоит из письменного предложения в стиле 6-страничного предложения NIH F30, 20-минутной устной презентации и устного экзамена. Экзамен проводят научный руководитель студента и 2-3 дополнительных преподавателя, обладающих соответствующими знаниями по теме диссертации.

    Заседания диссертационного комитета

    Начиная со второго года обучения студенты встречаются со своим диссертационным комитетом 1-2 раза в год, чтобы получить отзывы и советы.

    Защита диссертации

    Студенты должны сделать публичную презентацию своей диссертации, а также должны сдать закрытый устный защитный экзамен сразу после презентации своей диссертации. Экзамен проводится студенческой диссертационной комиссией, состоящей из научного руководителя и 3-4 дополнительных преподавателей.

    Дополнительная информация о некоторых наших курсах

    Labnet Enduro GDS Touch Imaging System, 302 нм, включает 5-мегапиксельную камеру

    Печатная страница

    Система визуализации Enduro GDS Touch, 302 нм, включает 5-мегапиксельную камеру, руководство F 1.4 линзы, встроенный сенсорный компьютер, универсальное напряжение. Система документации для сенсорного геля ENDURO ™ GDS — новейшее дополнение к нашей линейке оборудования для электрофореза. Эта современная система визуализации, разработанная для сложных задач, но с простым интерфейсом, обеспечивает невероятное сочетание производительности и ценности. Он идеально сочетается с быстро развивающимися технологиями электрофореза ENDURO ™ и лабораторной молекулярной биологии. Включает 5-мегапиксельную камеру высокого разрешения со встроенным светом Epi-Blue, идеально подходящую для приложений, требующих источника света с длиной волны 490 нм.Система предварительно сфокусирована, что сокращает количество шагов до захвата изображения. Компактность и встроенный шкаф с планшетом P. Установка не требуется — готово к работе из коробки!

    Код продукта: LNT GDST-1302

    Срок гарантии: 1 год

    Технические характеристики

    Загрузки

    Видео

    Камера — 5 МП (2592 x 1944), сенсор научного класса
    Объектив — ручной F 1.4 линзы (фокусировка не требуется)
    Стандартное освещение — эпи-синий и белый свет, 302 или 365 нм, просвечивающее УФ-излучение
    Вытяните УФ — для визуализации и обрезки лент
    Управление системой — компьютер со встроенным сенсорным экраном
    Фильтр — трехпозиционный (с EtBr)
    Размеры — 13,6 x 12,2 x 27 дюймов — 34,6 x 31,1 x 68,6 см
    Вес — 48 фунтов

    Система документации ENDURO GDS Touch Gel.

    Демонстрация системы документации ENDURO GDS Touch Gel

    Запросить цену

    Запросить дополнительную информацию

    Отправить коллеге

    вариаций репродуктивной биологии самцов черных медведей по JSTOR

    Абстрактный

    Мы сравнили репродуктивную биологию самцов черных медведей в двух исследуемых районах на разных широтах (36 и 47 ° с. в мужских репродуктивных ритмах; 2) социальные факторы не способствуют изменению.Обе гипотезы были отвергнуты. Профили тестостерона в сыворотке крови в этих двух регионах различались, причем более резкий пик приходился на период размножения с мая по июль среди медведей в Миннесоте. У медведей в Вирджинии и Северной Каролине был более длительный период повышенного уровня тестостерона в сыворотке, что, очевидно, соответствовало более продолжительным периодам размножения, о которых сообщалось в южных популяциях черного медведя. В обеих областях концентрация тестостерона в сыворотке и размер яичек уменьшались от периода размножения до осени. К декабрю, когда все медведи в Миннесоте были опознаны, яички поднялись в полость тела, и уровень тестостерона в сыворотке достиг минимума.Уровень тестостерона в сыворотке крови увеличился во время позднего осеменения (февраль-март), а яички некоторых медведей превратились в мошонку, что подтверждает предыдущие предположения о том, что репродуктивный цикл самцов запускается фотопериодом. Однако мы также наблюдали возрастные различия в секреции тестостерона между участками исследования, которые, по-видимому, были связаны с влиянием различных социальных структур.

    Информация о журнале

    The Journal of Mammalogy — ведущее издание Американского общества маммологов.Этот уважаемый международный научный журнал, издающийся с 1919 года, пропагандирует интерес к млекопитающим и их сохранение во всем мире, публикуя оригинальные и своевременные исследования по всем аспектам биологии млекопитающих; например, экология, генетика, сохранение, поведение, систематика, морфология и физиология.

    Информация об издателе

    Американское общество маммологов было основано в 1919 году и посвящено продвижение интереса к млекопитающим во всем мире посредством исследований, образования, сохранение и общение между учеными и широкой общественностью.В Общество добивается этого посредством ежегодных встреч, международных конференций, деятельность комитетов, научные и образовательные награды студентам, публикации научных и нетехнических материалов, в том числе Journal of Mammalogy, Виды млекопитающих и специальные публикации. Общество также поддерживает библиотека изображений млекопитающих, которая содержит множество исключительных фотографий обычных и редких млекопитающих, которых можно купить для общего пользования.