Раб тетр по биологии 8 класс гдз: ГДЗ по биологии 8 класс рабочая тетрадь Колесов, Маш, Беляев Дрофа ответы и решения онлайн. Задание: стр. 16

Содержание

▶▷▶▷ гдз к рабочей тетради по биологии 8 класс 2016

▶▷▶▷ гдз к рабочей тетради по биологии 8 класс 2016
ИнтерфейсРусский/Английский
Тип лицензияFree
Кол-во просмотров257
Кол-во загрузок132 раз
Обновление:07-03-2019

гдз к рабочей тетради по биологии 8 класс 2016 — Yahoo Search Results Yahoo Web Search Sign in Mail Go to Mail» data-nosubject=»[No Subject]» data-timestamp=’short’ Help Account Info Yahoo Home Settings Home News Mail Finance Tumblr Weather Sports Messenger Settings Want more to discover? Make Yahoo Your Home Page See breaking news more every time you open your browser Add it now No Thanks Yahoo Search query Web Images Video News Local Answers Shopping Recipes Sports Finance Dictionary More Anytime Past day Past week Past month Anytime Get beautiful photos on every new browser window Download ГДЗ по биологии 8 класс рабочая тетрадь Колесов yagdzcom/ 8 -klass/biologiya- 8 /gdz-po-biologii- 8 Cached ГДЗ » 8 класс » Биология » ГДЗ по биологии 8 класс рабочая тетрадь Колесов ГДЗ решебник к рабочей тетради по биологии 8 класс Колесов Маш Беляев ФГОС Дрофа белая ГДЗ по биологии 8 класс рабочая тетрадь Колесов Маш Беляев gdz-putinainfo/ 8 -klass/biologiya- 8 /gdz-otvety Cached ГДЗ по биологии 8 класс рабочая тетрадь Колесов Маш Беляев ГДЗ готовые домашние задания к рабочей тетради Биология 8 класс Колесов Маш Беляев 2015- 2016 Дрофа ФГОС от Путина Гдз К Рабочей Тетради По Биологии 8 Класс 2016 — Image Results More Гдз К Рабочей Тетради По Биологии 8 Класс 2016 images ГДЗ 7 класс Рабочая тетрадь, Биология Латюшин ВВ 2016 г my-gdzsu/gdz-7-klass-rabochaya-tetrad-biologiya Cached Решебник Готовые Домашние Задания для 7 класса к рабочей тетради по Биологии Латюшин ВВ 2016 г ГДЗ : Рабочая тетрадь, Биология 7 класс Латюшин ВВ 2016 г Более 400 ГДЗ ГДЗ по Биологии 8 класс Рабочая тетрадь — Пасечник ВВ yougdzcom/exesize/311 Cached ГДЗ по Биологии 8 класс Рабочая тетрадь — Пасечник ВВ, Швецов ГГ Просвещение 2017 год ГДЗ (ответы) Робочий зошит Биология 8 клас Вихренко 2016 4bookorg › … › 8 класс › Біологія Ответы к рабочей тетради Биология 8 класс Вихренко — решебник Смотреть ГДЗ (решебник) онлайн: Страницы № 5 — 24 Решебник (ГДЗ) Біологія 8 класс КМ Задорожний 2016 Робочий vshkolecom › … › Біологія Полный и качественный решебник ( ГДЗ ) Біологія 8 класс К М Задорожний 2016 Робочий зошит Доступно на ваших смартфонах ГДЗ по биологии 9 класс — yagdzcom yagdzcom/9-klass/biologiya-9/gdz-rabochaya Cached ГДЗ по биологии 9 класс рабочая тетрадь Цибулевский Захаров Сонин ГДЗ решебник к рабочей тетради по биологии 9 класс Цибулевский Захаров Сонин 2016 Дрофа ФГОС к учебнику Мамонтова Захарова ГДЗ по биологии 9 класс рабочая тетрадь Пасечник Швецов gdz-putinainfo/9-klass/biologiya-9/gdz-otvety Cached ГДЗ по биологии 9 класс рабочая тетрадь Пасечник Швецов ГДЗ готовые домашние задания к рабочей тетради Биология 9 класс Пасечник Швецов 2015- 2016 Дрофа ФГОС от Путина Гдз по биологии 8 класс рабочая тетрадь жемчугова романова 2016 ribedксгувдрф/page/gdz-po-biologii-8-klass Cached ГДЗ по биологии 7 класс Рабочая тетрадь Латюшин Ламехова Подробные решения и ответы к рабочей тетради по биологии за 8 класс , авторов Д пособие обществознанию содержит материалы учебного курса 8 -й средней ГДЗ решебник рабочая тетрадь по биологии 8 класс Колесов, Маш gdzgoorg/ 8 -klass/632-biologiya/317-kolesov-mash Cached В рабочей тетради по этому предмету школьной программы К по биологии 8 класс Колесов Promotional Results For You Free Download | Mozilla Firefox ® Web Browser wwwmozillaorg Download Firefox — the faster, smarter, easier way to browse the web and all of Yahoo 1 2 3 4 5 Next 27,700 results Settings Help Suggestions Privacy (Updated) Terms (Updated) Advertise About ads About this page Powered by Bing™

  • напишите нам Маркет — смартфоны Xiaomi Автору — сколько стоит это авто Недвижимость — нужна ли регистрация Такси — для тех
  • что страницы нет по нашей вине
  • что страницы нет по нашей вине

напишите нам Маркет — смартфоны Xiaomi Автору — сколько стоит это авто Недвижимость — нужна ли регистрация Такси — для тех

напишите нам Маркет — смартфоны Xiaomi Автору — сколько стоит это авто Недвижимость — нужна ли регистрация Такси — для тех

  • smarter
  • Биология 7 класс Латюшин ВВ 2016 г Более 400 ГДЗ ГДЗ по Биологии 8 класс Рабочая тетрадь — Пасечник ВВ yougdzcom/exesize/311 Cached ГДЗ по Биологии 8 класс Рабочая тетрадь — Пасечник ВВ
  • авторов Д пособие обществознанию содержит материалы учебного курса 8 -й средней ГДЗ решебник рабочая тетрадь по биологии 8 класс Колесов

404 Найти Ошибка 404 Нет такой страницы Если вы считаете, что страницы нет по нашей вине, напишите нам Маркет — смартфоны Xiaomi Автору — сколько стоит это авто Недвижимость — нужна ли регистрация Такси — для тех, кому срочно Работа — маркировщик Трекер — организуйте работу Деньги — оплата света и воды Компания About © Яндекс «static»:»22036″

ГДЗ по Биологии для 8 класса Соловьёва А.

Р., Ибрагимова Б.Т. на 5

Авторы: Соловьёва А.Р., Ибрагимова Б.Т..

Издательство: Атамұра 2018

Если подросток чувствует, что времени на подготовку к урокам у него стало уходить очень много, то значит пора обратиться к электронному помощнику, коим является «ГДЗ по биологии за 8 класс Соловьёва, Ибрагимова (Атамұра)». Благодаря сборнику готовых домашних заданий школьнику удастся восполнить пробелы в знаниях и разобраться в новом материале. Это приведет к тому, что выполнение номеров будет отнимать у подростков считанные минуты, и они перестанут окружать себя большим количеством информационных источников и путаться в обилии сведений.

Рабочая программа по биологии

На уроках и дома ребята будут выполнять различные задания из учебника, начиная с самых простых и заканчивая сложными, чтобы вникнуть в суть следующих тем:

  1. Клетка строение, химический состав и жизнедеятельность.
  2. Нервная и эндокринная системы.
  3. Органы чувств. Анализаторы.
  4. Соединение костей.
  5. Скелет головы и туловища.
  6. Нарушение осанки и плоскостопие.

Многим ребятам очень тяжело изучать биологию, потому что им необходимо запомнить большое количество сложных терминов и научиться все это применять в практической деятельности. Если школьник искреннее желает исправить отметки по предмету и успешно освоить курс, то ему необходимо воспользоваться данным методическим пособием формата ГДЗ, которое было выпущено довольно известным издательством под названием «Атамұра».

Онлайн-помощник для педагогов

Так как учителя тоже готовятся к каждому уроку, им без помощи сборника верных ответов не обойтись. Благодаря этой ценной книге им удастся: разработать собственную методику обучения, подобрать вопросы для тестов и практических, провести опрос в классе, сэкономить время на проверке тетрадей и написать карточки-шпаргалки для занятий. Частным репетиторам также не стоит обходить этот справочник стороной. С его помощью они научатся проводить уроки в более занимательной форме, чтобы у ребят не пропал интерес к данной дисциплине.

Родители и решебник по биологии за 8 класс Соловьёва

Даже несмотря на то, что школьники находятся в таком возрасте, когда и сами могут готовиться к занятиям, все же поддержка близких им не помешает. А если родители желают принять участие в образовательном процессе своих детей, то им обязательно нужно ознакомиться с материалами, представленными в «ГДЗ по биологии за 8 класс Соловьёва А. Р., Ибрагимова Б. Т. (Атамұра)». Благодаря справочнику с ответами им удастся проверить готовность ученика к школе и помочь ему разобраться в трудных для него моментах.

ГДЗ решебник по биологии 8 класс Захаров, Сонин рабочая тетрадь Дрофа

Биология 8 класс

Тип пособия: Рабочая тетрадь

Авторы: Захаров, Сонин

Издательство: «Дрофа»

Предмет биологии состоит из самых разнообразных тем: любой человек сможет найти в этой науке раздел, который его искренне заинтересует. Но именно это разнообразие зачастую приводит к проблемам со стабильной успеваемостью – ученик с увлечением изучает понравившуюся ему тему и лишь мельком просматривает скучный для него параграф. Это же относится и к помощи родителей – взрослые также помнят какую-либо одну интересную им тему, но не могут стать надежными подсказчиками по всему курсу биологии. Безусловно, эта дисциплина не входит в число экзаменационных, но серьезно осложнить текущую работу над успеваемостью и испортить аттестат сможет однозначно.

Ученику поможет рабочая тетрадь Сонина

Безусловно, помощь профессионального репетитора иногда необходима в освоении таких дисциплин, как алгебра, физика или химия. Да и в случае с этими чрезвычайно сложными науками этот способ не всегда является наилучшим, требуя слишком больших затрат времени, которого и так катастрофически не хватает. Кто же поможет школьнику кроме репетитора и родителей? Виртуальный консультант — решебник к пособию «Биология 8 класс Рабочая тетрадь Захаров, Сонин (Дрофа)», разработанный настоящими профессионалами именно для того, чтобы ученики могли добиваться максимальных успехов в учебе с минимальными затратами времени.

Что включено в состав пособия

Рабочая тетрадь охватывает все темы основного учебника биологии восьмого класса:

  1. Пресмыкающиеся и рептилии.
  2. Происхождение птиц.
  3. Класс Млекопитающие.

Издание содержит вопросы и подробные ответы, дополненные схемами и таблицами.

Как правильно использовать ГДЗ

Если подросток поставит главной своей целью экономию времени и просто спишет готовое решение, абсолютно не понимая его смысл, он перехитрит сам себя, ведь на контрольной работе он не сможет подглядывать правильный ответ. Результат – низкий бал на проверочной работе и дополнительные затраты времени на исправление сложившейся ситуации. Пособие окажет настоящую поддержку только тому, кто правильно организовал свою работу:

  • самостоятельно выполняет заданное упражнение;
  • только после этого сверяет собственный ответ с вариантом решебника;
  • проверяет правильность оформления ответа.

Пособие окажется полезным не только восьмикласснику

, но и ученикам старших классов при необходимости повторить пройденный материал.

учебники, ГДЗ, учебные пособия, справочная литература

Биология 8 класс: учебники, ГДЗ, учебные пособия, справочная литература учебникиГДЗтесты и ГИАдля учителя
  • Биология — Животные — Учебник для 7-8 классов — Под ред. Козлова М.А.
  • Биология, 5-9 класс, Программа, Пономарева И.Н., Кумченко В.С., 2012
  • Биология, 6-8 классы, уроки-экскурсии на территории учреждений общ. сред, образования, пособие для учителей учреждений общ. сред, образования, Клевец И.Р., 2013
  • Биология, 8 класс, Базанова Т.И., Павиченко Ю.В., Шатровский А.Г., 2008
  • Биология, 8 класс, Вахрушев А.А., Родионова Е.И., Белицкая Г.Э., Раутиан А.С., 2015
  • Биология, 8 класс, Драгомилов А.Г., Маш Р. Д., 2008
  • Биология, 8 класс, Камлюк Л.В., 2009
  • Биология, 8 класс, Камлюк Л.В., Шалапенок Е.С., 2010
  • Биология, 8 класс, Камлюк Л.В., Шалапенок Е.С., Александрович О.Р., 2005
  • Биология, 8 класс, Молибошко Т.А., Рогожников О.Н., 2012
  • Биология, 8 класс, Пасечник В.В., 2010
  • Биология, 8 класс, Познай себя, Вахрушев А.А., Родионова Е.И., 2009
  • Биология, 8 класс, Серебряков В.В., Балан П.Г., 2008
  • Биология, 8 класс, Технологические карты уроков, Константинова И.В., 2016
  • Биология, 8 класс, Человек и его здоровье, Рохлов В.С., Трофимов С.Б., 2007
  • Биология, учебник для 8 класса, Матяш Н.Ю., 2016
  • Биология, учебное пособие для 8-го класса общеобразовательных учреждений с русско языком обучения, Камлюк Л.В., Шалапенок Е.С., 2010
  • Биология, Человек и его здоровье, 8 класс, Любимова З.В., Маринова К.В., 2012
  • Биология, Человек, 8 класс, Колесов Д.В., Маш Р. Д., Беляев И.Н., 2016
  • Биология, Человек, 8 класс, Сонин Н.И., Сапин М.Р., 2012
  • Биология, Человек, Культура здоровья, 8 класс, Сухорукова Л.Н., Кучменко В.С., 2009
  • Биология, Человек, Культура здоровья, 8 класс, Сухорукова Л.Н., Кучменко В.С., Цехмистренко Т.А., 2009
  • Биология. Человек — Учебник для 8 класса — Колесов Д.В., Маш Р.Д., Беляев И.Н. — 2002
  • Изучение биологии в 8 классе, Конюшко В.С., Кузьменко В.Я., Летко А.А., Опарина В.В., 2004
  • Уроки биологии, 6-9 класс, Борщевская Е.В., Гричик В.В., Мицкевич Л.С., 2014
  • Уроки биологии, 6-9 класс, Пособие для учителей, Борщевская Е.В., Гричик В.В., Мицкевич Л.С., 2014
  • Человек — Анатомия, Физиология и Гигиена — Учебник для 8 класса — Цузмер А.М., Петришина О.Л.
  • Человек и его здоровье, 8 класс, Аминов Б., Тилавов Т., Мявлянов О., 2006
  • ГДЗ по биологии для 8 класса 2005 к «Учебник. Биология. Человек, 8 класс, Сонин Н.И., Сапин М. Р., 2005»
  • ГДЗ по биологии, 8 класс, Пасечник В.В., 2007, к учебнику по биологии за 8 класс, Колесов Д.В., Маша Р.Д., Беляев И.Н.
  • Биология, 8 класс, Диагностическая работа, Здоровый стиль жизни, Спецификация, 2016
  • Биология, 8 класс, Диагностическая работа, Спецификация, 2016
  • Биология, 8 класс, Рабочая тетрадь № 1, Маш Р.Д., Драгомилов А.Г., 2013
  • Биология, 8 класс, Рабочая тетрадь № 2, Маш Р.Д., Драгомилов А.Г., 2013
  • Биология, 8 класс, Рабочая тетрадь, Преображенская Н.В., 2011
  • Биология, 8 класс, Тематические тестовые задания для подготовки к ГИА, Циклов С.Б., 2011
  • Биология, Человек, 8 класс, Рабочая тетрадь, Сонин Н.И., Агафонова И.Б., 2013
  • Задания 2 этапа XXXI Всероссийской биологической олимпиады школьников, Крымский федеральный округ, 2014-2015 учебный год, 8 класс
  • Тесты по биологии, 8 класс, Бирилло Т.А., 2008
  • Тесты по биологии, 8 класс, Краева Е. В., 2008
  • Тесты по биологии. 6 11 класс. Сухова Т.С. 1998

индуцируемая экспрессия белка с использованием системы T-REx | Thermo Fisher Scientific

Связанная информация о продукте

Обзор Система Invitrogen T-REx — это регулируемая тетрациклином система экспрессии млекопитающих, которая использует регуляторные элементы из оперона устойчивости к тетрациклину (Tet), кодируемому E. coli, Tn10 (Hillen and Berens, 1994; Hillen et al., 1983). ). Регуляция тетрациклина в системе T-REx основана на связывании тетрациклина с репрессором Tet и дерепрессии промотора, контролирующего экспрессию интересующего гена (Yao et al., 1998). Основные компоненты системы T-REx включают:

  • Плазмида индуцируемой экспрессии для экспрессии интересующего гена под контролем сильного раннего промотора цитомегаловируса человека (CMV) и двух сайтов тетрациклинового оператора 2 (TetO2)
  • Регуляторная плазмида pcDNA6 / TR ™, которая кодирует репрессор Tet (TetR) под контролем Тетрациклина промотора CMV человека для индукции экспрессии.
  • Контрольная плазмида экспрессии, содержащая ген lacZ, который при котрансфекции pcDNA6 / TR ™, экспрессирует β-галактозидазу при индукции тетрациклином.


Для получения конкретной информации о индуцибельном векторе экспрессии и соответствующем векторе положительного контроля, содержащем ген lacZ, обратитесь к руководству по используемому индуцибельному вектору экспрессии.

Описание системы T-REx

В системе T-REx экспрессия интересующего вас гена подавляется в отсутствие тетрациклина и индуцируется в присутствии тетрациклина (Yao et al., 1998). В отличие от других систем, регулируемых тетрациклином, которые используют гибридные регуляторные молекулы и вирусные домены трансактивации (Gossen and Bujard, 1992), система T-REx использует только регуляторные элементы из природного оперона Tet (Yao et al., 1998). Экспрессия гена, регулируемая тетрациклином в системе T-REx, больше напоминает регуляцию нативного бактериального тет-оперона (Hillen and Berens, 1994; Hillen et al. , 1983) и позволяет избежать потенциально токсичных эффектов вирусных трансактивационных доменов, наблюдаемых у некоторых млекопитающих. Сотовые линии.

Основным компонентом системы T-REx является индуцируемая экспрессионная плазмида. Экспрессия интересующего вас гена из индуцибельного вектора экспрессии контролируется сильным промотором CMV (Andersson et al., 1989; Boshart et al., 1985; Nelson et al., 1987), в которую последовательно вставлены 2 копии последовательности оператора tet 2 (TetO2). Последовательности TetO2 состоят из 2 копий 19-нуклеотидной последовательности 5´-TCCCTATCAGTGATAGAGA-3´, разделенных спейсером из 2 пар оснований (Hillen and Berens, 1994; Hillen et al., 1983). Каждая 19 нуклеотидная последовательность TetO2 служит сайтом связывания для 2 молекул репрессора Tet. Для получения дополнительной информации о последовательностях операторов Tet и специфических особенностях каждого индуцибельного вектора экспрессии, пожалуйста, обратитесь к руководству по используемому вами вектору.

Вторым основным компонентом системы T-REx является регуляторный вектор pcDNA6 / TR, который экспрессирует высокие уровни гена TetR (Postle et al., 1984) под контролем промотора CMV человека. Оба вектора T-REx могут быть введены в клетки-хозяева млекопитающих стандартными методами трансфекции.

Механизм репрессии

В отсутствие тетрациклина репрессор Tet образует гомодимер, который связывается с чрезвычайно высокой аффинностью с каждой последовательностью TetO2 в промоторе индуцибельного вектора экспрессии (Hillen and Berens, 1994).2 сайта TetO2 в промоторе индуцибельного вектора экспрессии служат сайтами связывания для 4 молекул (или 2 гомодимеров) репрессора Tet. Сродство репрессора Tet к оператору tet составляет KB = 2 x 1011 М-1 (при измерении в физиологических условиях), где KB — константа связывания (Hillen and Berens, 1994). Связывание гомодимеров репрессора Tet с последовательностями TetO2 подавляет транскрипцию интересующего вас гена. При добавлении тетрациклин связывается с высоким сродством с каждым гомодимером репрессора Tet в стехиометрии 1: 1 и вызывает конформационное изменение репрессора, которое делает его неспособным связываться с оператором Tet. Константа ассоциации, KA, тетрациклина для репрессора Tet составляет 3 x 10 9 M-1 (Hillen and Berens, 1994). Комплекс репрессор Tet: тетрациклин затем отделяется от оператора Tet и обеспечивает индукцию транскрипции из интересующего гена.

Схема эксперимента

Интересующий ген клонируют в сайт множественного клонирования индуцибельного вектора экспрессии, и полученную конструкцию котрансфицируют регуляторной плазмидой pcDNA6 / TR ™ в клетки млекопитающих.После трансфекции клетки обрабатывают тетрациклином, чтобы уменьшить репрессию гибридного промотора CMV / TetO2 в индуцибельном векторе экспрессии и вызвать транскрипцию интересующего вас гена.

Вектор положительного контроля, содержащий ген lacZ, можно временно котрансфицировать в клетки млекопитающих с помощью pcDNA6 / TR ™, чтобы продемонстрировать, что система правильно работает в вашей клеточной линии. Стабильные клеточные линии, экспрессирующие репрессор Tet из pcDNA6 / TR ™, могут быть созданы для использования в качестве хозяев для конструкций на основе индуцибельных векторов экспрессии.

K102001, K103001, K102002, K103002, V103320, V103020, V102520, V102020, K106001, K106001, h21001, R71007, R71407, R71207

Системное руководство T-REx поставляется с перечисленными ниже наборами. Основная система включает выбранный индуцибельный вектор экспрессии, регуляторный вектор и праймеры для секвенирования. Полная система включает в себя основную систему, а также агентов по стимулированию и отбору. См. Ниже подробное описание содержимого каждого набора T-REx.

Транспортировка / хранение

Базовая система T-REx поставляется при комнатной температуре.Хранить при -20 ° C.
Полная система T-REx поставляется в 2 коробках. Хранить, как описано ниже:

  • Коробка 1 содержит векторы, праймеры и бластицидин и поставляется при комнатной температуре. После получения удалите векторы и праймеры и храните при -20 ° C. Порошок бластицидина следует хранить при температуре + 4 ° C.
  • Коробка 2 содержит тетрациклин и зеоцин и поставляется на голубом льду. Хранить при + 4 ° C. Для длительного хранения (> 6 месяцев) хранить при -20 ° C. Храните тетрациклин и зеоцин в защищенном от света месте.


Содержимое набора

Системы T-REx Complete и T-REx Core включают следующие регуляторные векторы и праймеры для секвенирования. Хранить при -20 ° C.

Реагент

Количество

Комментарии

pcDNA6 / TR ™

20 мкг, лиофилизировано в ТЕ, pH 8,0

Регуляторный вектор, экспрессирующий репрессор тетрациклина (Tet)

CMV Прямой праймер

(21-мер)

2 мкг (306 пмолей), лиофилизировано в ТЕ, pH 8.0

5´-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3´

Обратный праймер BGH

(18-мерный)

2 мкг (358 пмоль), лиофилизировано в ТЕ, pH 8,0

5´-tagaaggcacagtcgagg-3´


Вектор индуцируемой экспрессии

Каждая полная и основная система T-REx также включает один из следующих индуцируемых векторов экспрессии и соответствующий вектор положительного контроля, содержащий ген lacZ.Пожалуйста, обратитесь к руководству по векторам для получения конкретной информации, относящейся к каждому индуцибельному вектору экспрессии. Хранить при -20 ° C.

Реагент

Поставляемое количество

Комментарии

Тетрациклин

5 г, порошок

Побуждающий агент

Зеоцин

1 г

Селекционный агент для индуцибельной экспрессионной плазмиды

Бластицидин

50 мг, порошок

Селекционный агент для плазмиды pcDNA6 / TR ™


Клеточные линии T-REx

Для вашего удобства Invitrogen предлагает три линии клеток млекопитающих, которые стабильно экспрессируют репрессор Tet.Клетки T-REx-293 и клетки T-REx-HeLa экспрессируют репрессор Tet из pcDNA6 / TR ™, и их следует поддерживать в среде, содержащей бластицидин. Клетки T-REx-U2OS экспрессируют репрессор Tet из pCEP4 / tetR, как описано в Yao et al., 1998, и их следует поддерживать в среде, содержащей гигромицин. Обратите внимание, что плазмида pCEP4 / tetR в клетках T-REx-U2OS поддерживается эписомально, но стабильна при отборе гигромицина. Для получения дополнительной информации посетите сайт www.thermofisher.com или позвоните в службу технической поддержки.

Введение

Следующий раздел содержит рекомендации по поддержанию и распространению регуляторного вектора pcDNA6 / TR.

Общие методы молекулярной биологии

Для получения помощи по трансформациям E. coli , анализу рестрикционных ферментов, очистке одноцепочечной ДНК, секвенированию ДНК и биохимии ДНК, пожалуйста, обратитесь к Молекулярному клонированию: лабораторное руководство (Sambrook et al. al., 1989) или Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al., 1994).

E. coli s train

Многие штаммы E. coli подходят для размножения вектора pcDNA6 / TR, включая TOP10F´ (Каталожный номер C615-00), DH5αF´ и INVαF´ ( Каталожный номер C658? 00). Мы рекомендуем вам размножить вектор pcDNA6 / TR в штаммах E. coli с дефицитом рекомбинации (recA) и эндонуклеазой A (endA).

Для вашего удобства, TOP10F´ E. coli доступны в виде химически компетентных или электрокомпетентных клеток от Invitrogen.

Артикул

Количество

Кат.

One Shot TOP10F´ (химически компетентные клетки)

21 x 50 мкл

C3030-03

Electrocomp TOP10F´ (электрокомпетентные ячейки)

5 х 80 мкл

C665-55

Максимальная эффективность Dh20B химически компетентных клеток

5 х 0.2 мл

18297-010


Метод преобразования

Вы можете использовать любой метод преобразования для преобразования. Химическое превращение наиболее удобно для многих исследователей. Электропорация — наиболее эффективный и предпочтительный метод для больших плазмид.

Поддержание плазмид

Вектор pcDNA6 / TR ™ содержит гены устойчивости к ампициллину и бластицидину, чтобы сделать возможным селекцию плазмиды с использованием ампициллина или бластицидина.Для размножения и поддержания плазмиды pcDNA6 / TR мы рекомендуем использовать следующую процедуру:

  1. Ресуспендируйте вектор в 20 мкл стерильной воды для приготовления исходного раствора 1 мкг / мкл. Храните основной раствор при -20 ° C.

  2. Используйте исходный раствор для трансформации штаммов recA, endA E. coli , таких как TOP10F´, INVαF´ или эквивалентных.

  3. Отбор трансформантов на чашках с агаром LB, содержащих от 50 до 100 мкг / мл ампициллина или 50 мкг / мл бластицидина в LB с низким содержанием соли.

  4. Подготовьте запас глицерина каждой плазмиды для длительного хранения (см. Протокол ниже).


Отбор в E. coli

Для облегчения отбора устойчивых к бластицидину E. coli концентрация соли в среде должна оставаться низкой (<90 мМ), а pH должен составлять 7,0. Приготовьте бульон LB с низким содержанием соли и тарелки по рецепту. Неспособность снизить содержание соли в вашей среде LB приведет к невозможности отбора из-за ингибирования препарата, если не используется более высокая концентрация бластицидина.

Подготовка запаса глицерина

После того, как вы определили правильный клон, обязательно очистите колонию и сделайте запас глицерина для длительного хранения. Также рекомендуется хранить запас ДНК вашей плазмиды при -20 ° C.

  1. Разложите исходную колонию на планшете LB, содержащем 50 мкг / мл ампициллина или 100 мкг / мл бластицидина в LB с низким содержанием соли. Инкубируйте планшет при 37 ° C в течение ночи.

  2. Выделите одну колонию и инокулируйте в 1-2 мл LB, содержащего 50 мкг / мл ампициллина или 50 мкг / мл бластицидина в LB с низким содержанием соли.

  3. Выращивайте культуру до средней логарифмической фазы (OD600 = 0,5-0,7).

  4. Смешайте 0,85 мл культуры с 0,15 мл стерильного глицерина и перенесите в криопробирку.

  5. Хранить при -80 ° C.


Плазмидный препарат

Плазмидная ДНК для трансфекции в эукариотические клетки должна быть очень чистой и не содержать фенола и хлорида натрия. Загрязняющие вещества убивают клетки, а соль мешает липидам, снижая эффективность трансфекции.Мы рекомендуем изолировать ДНК с помощью S.N.A.P. Набор MiniPrep (10-15 мкг ДНК, № по каталогу K1900-01), S.N.A.P. MidiPrep Kit (10-200 мкг ДНК, № по каталогу K1910-01) или центрифугирование в градиенте CsCl.

Введение

После того, как вы получили чистые плазмидные препараты своей индуцибельной экспрессионной плазмиды и pcDNA6 / TR ™, вы готовы котрансфицировать две плазмиды в выбранную линию клеток млекопитающих. Мы рекомендуем вам включить вектор положительного контроля и имитацию трансфекции (отрицательный контроль) для оценки ваших результатов.Для получения дополнительной информации о векторе положительного контроля, пожалуйста, обратитесь к руководству по индуцируемому вектору экспрессии, который вы используете.

Методы трансфекции

Для установленных клеточных линий (например, HeLa, COS-1), пожалуйста, проконсультируйтесь с оригинальными справочными материалами или поставщиком вашей клеточной линии для выбора оптимального метода трансфекции. Мы рекомендуем вам точно следовать протоколу для вашей клеточной линии. Обратите особое внимание на требования к среде, когда нужно пропускать клетки и в каком разведении разделять клетки.Дополнительная информация представлена ​​в Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al., 1994).

Способы трансфекции включают фосфат кальция (Chen and Okayama, 1987; Wigler et al., 1977), липид-опосредованный (Felgner et al., 1989; Felgner and Ringold, 1989) и электропорацию (Chu et al., 1987; Сигекава и Дауэр, 1988). Invitrogen предлагает набор для трансфекции фосфатом кальция для трансфекции клеток млекопитающих и реагент Lipofectamine 2000 для проведения липид-опосредованной трансфекции.

Сыворотка с пониженным содержанием тетрациклина

При культивировании клеток в среде, содержащей фетальную бычью сыворотку (FBS), обратите внимание, что многие партии FBS содержат тетрациклин, поскольку FBS обычно выделяют от коров, которые получали диету, содержащую тетрациклин. Если вы культивируете свои клетки в среде, содержащей FBS, в которой не содержится тетрациклин, вы можете наблюдать низкую базальную экспрессию интересующего вас гена в отсутствие тетрациклина. Мы культивировали клетки наших млекопитающих в среде, содержащей FBS, который не может быть восстановлен в тетрациклине, и наблюдали неопределяемую или очень низкую базальную экспрессию ß-галактозидазы из вектора положительного контроля в отсутствие дополнительного тетрациклина.Если интересующий вас ген производит токсичный белок, вы можете культивировать свои клетки в FBS с пониженным содержанием тетрациклина.

Для получения дополнительной информации, пожалуйста, свяжитесь с нашими торговыми представителями Gibco FBS, чтобы найти подходящий FBS для ваших потребностей в культуре клеток

Тетрациклин

Тетрациклин (MW = 444,4) обычно используется в качестве антибиотика широкого спектра действия и препятствует трансляции блокирование удлинения полипептидной цепи у бактерий. В системе T-REx тетрациклин используется в качестве индуцирующего агента для индукции транскрипции интересующего гена из индуцибельного вектора экспрессии.Тетрациклин индуцирует транскрипцию путем связывания с гомодимером репрессора Tet и заставляет репрессор претерпевать конформационное изменение, которое делает его неспособным связываться с оператором Tet. Константа ассоциации тетрациклина с репрессором Tet составляет 3 x 109 M-1 (Takahashi et al., 1991). Обратите внимание, что концентрации тетрациклина, используемые для индукции экспрессии генов в системе T-REx, обычно недостаточно высоки, чтобы быть токсичными для клеток млекопитающих.

  • Тетрациклин светочувствителен.Хранить порошкообразный препарат при температуре + 4 ° С в темноте. Непосредственно перед использованием приготовьте среду, содержащую тетрациклин.
  • Тетрациклин токсичен. Не глотайте и не вдыхайте порошок или растворы, содержащие препарат.
  • Надевайте перчатки, лабораторный халат и защитные очки при работе с тетрациклином и растворами, содержащими тетрациклин.


Приготовление тетрациклина

Для приготовления исходного раствора из тетрациклиновой соли, поставляемой с полным комплектом:

1.Взвешивают 10 мг тетрациклина и переносят в стерильную коническую полипропиленовую пробирку на 15 мл.

2. Ресуспендируйте 10 мг тетрациклина в 10 мл воды для получения желтого основного раствора с концентрацией 1 мг / мл.

Примечание: Если вы используете другую форму тетрациклина (т.е. форму свободного основания), ресуспендируйте в 100% этаноле, а не в воде.

3. Хранить основной раствор при -20 ° C в защищенном от света месте.

Поскольку экспрессия, регулируемая тетрациклином в системе T-REx, основана на механизме репрессии / дерепрессии, количество репрессора Tet, которое экспрессируется в линии клеток-хозяев из pcDNA6 / TR, будет определять уровень репрессии транскрипции оператора Tet. последовательности в вашей конструкции индуцибельной экспрессии.Уровни Tet-репрессора должны быть достаточно высокими, чтобы надлежащим образом подавлять базальную транскрипцию. Мы варьировали соотношение pcDNA6 / TR и индуцибельной экспрессионной плазмиды, которую мы временно котрансфицируем в клетки млекопитающих, чтобы оптимизировать репрессию и индуцибельность гибридного промотора CMV / TetO2 в индуцибельной экспрессионной плазмиде. Мы рекомендуем вам котрансфицировать вашу линию клеток-хозяев млекопитающих в соотношении не менее 6: 1 (мас. / Мас.) PcDNA6 / TR: ДНК индуцируемой экспрессионной плазмиды.


Котрансфекция и индукция тетрациклином

Ниже приведены инструкции по котрансфекции индуцибельной конструкции экспрессии (или контрольной плазмиды) и pcDNA6 / TR в клеточную линию млекопитающих и индукции экспрессии интересующего белка с помощью тетрациклина.Поскольку каждая клеточная линия отличается и может потребовать другого метода трансфекции, могут потребоваться некоторые эмпирические эксперименты для определения оптимальных условий для индуцибельной экспрессии.

  • Используйте для трансфекции клетки, которые примерно на 60% конфлюэнтны.
  • Котрансфицируйте плазмиду pcDNA6 / TR и индуцибельную экспрессионную конструкцию в соотношении 6: 1 (масса: масса) в выбранную линию клеток, используя предпочитаемый вами метод. Абсолютные количества плазмиды будут варьироваться в зависимости от метода трансфекции и используемой клеточной линии.
  • После трансфекции добавьте свежую среду и дайте клеткам восстановиться в течение 24 часов перед индукцией.
  • Удалите среду и добавьте к клеткам свежую среду, содержащую тетрациклин в соответствующей концентрации. Как правило, мы рекомендуем вам добавить тетрациклин до конечной концентрации 1 мкг / мл (5 мкл исходного раствора с концентрацией 1 мг / мл на 5 мл среды) к клеткам и инкубировать клетки в течение 24 часов при 37 ° C.
  • Соберите клетки и проанализируйте экспрессию вашего гена.


Оптимизация экспрессии

Вы можете изменить концентрацию тетрациклина (0.От 1 до 1 мкг / мл) и время воздействия тетрациклина (от 8 до 24 часов) для оптимизации или модуляции экспрессии вашей клеточной линии.

Другие индукторы

Вы можете использовать доксициклин в качестве альтернативного индуктора в системе T-REx. Доксициклин аналогичен тетрациклину по механизму действия и демонстрирует такие же характеристики реакции на дозу и индукцию, что и тетрациклин в системе T-REx. Доксициклин имеет более длительный период полувыведения, чем тетрациклин (48 часов по сравнению с24 часа соответственно). Доксициклин можно получить от Sigma-Aldrich (№ по каталогу D9891).

Создание стабильных клеточных линий

Введение

После того, как вы установили, что ваша конструкция может быть индуцибельно экспрессирована, вы можете захотеть создать стабильную клеточную линию, которая конститутивно экспрессирует репрессор Tet и индуцибельно экспрессирует интересующий вас ген. Мы рекомендуем вам сначала создать стабильную клеточную линию, которая экспрессирует только репрессор Tet, а затем использовать эту клеточную линию для создания второй клеточной линии, которая будет экспрессировать интересующий вас ген из индуцибельной экспрессионной плазмиды.В качестве альтернативы, вы можете трансфектировать обе плазмиды (pcDNA6 / TR и индуцибельный вектор экспрессии) и двойную селекцию с бластицидином и зеоцином, чтобы изолировать одну стабильную клеточную линию, экспрессирующую как репрессор Tet, так и интересующий вас ген.

Три клеточные линии T-REx, которые стабильно экспрессируют репрессор Tet, доступны от Invitrogen. Если вы хотите проверить индуцируемую тетрациклином экспрессию интересующего вас гена в клетках 293, HeLa или U2OS, вы можете использовать одну из линий клеток T-REx в качестве хозяина для создания вашей двойной стабильной клеточной линии.Для получения дополнительной информации посетите сайт www.invitrogen.com или позвоните в службу технической поддержки.

Напоминание: При создании стабильной клеточной линии, экспрессирующей репрессор Tet, вы захотите выбрать клоны, которые экспрессируют самые высокие уровни репрессора Tet, чтобы использовать их в качестве хозяев для вашей конструкции индуцибельной экспрессии. Те клоны, которые экспрессируют самые высокие уровни репрессора Tet, должны демонстрировать наиболее полное подавление базовой транскрипции интересующего вас гена.

Определение чувствительности к антибиотикам

Для успешного создания стабильной клеточной линии, экспрессирующей репрессор Tet и интересующий белок, вам необходимо определить минимальную концентрацию каждого антибиотика (бластицидина и зеоцина), необходимую для уничтожения вашей нетрансфицированной линии клеток-хозяев .Для каждого антибиотика проверьте диапазон концентраций (см. Ниже), чтобы убедиться, что вы определили минимальную концентрацию, необходимую для вашей клеточной линии. Используйте приведенный ниже протокол, чтобы определить минимальные концентрации зеоцина и бластицидина, необходимые для предотвращения роста родительской клеточной линии. Инструкции по приготовлению и хранению бластицидина см. В Приложении на стр. 14. Инструкции по приготовлению и хранению зеоцина можно найти в руководстве по индуцибельным векторам экспрессии.

  1. Пластину или разделите сливную пластину так, чтобы ячейки были примерно на 25% сливными.Для каждого антибиотика приготовьте набор из 6-7 пластинок. Добавьте в каждую чашку набора антибиотик следующих концентраций:
    • Для отбора бластицидина, тест 0, 1, 3, 5, 7,5 и 10 мкг / мл бластицидин
    • Для отбора зеоцина, тест 0, 50, 125, 250, 500, 750 и 1000 мкг / мл Zeocin

  2. Пополняйте селективную среду каждые 3-4 дня и наблюдайте за процентом выживших клеток.

  3. Регулярно подсчитывайте количество жизнеспособных клеток, чтобы определить подходящую концентрацию антибиотика, которая предотвращает рост в течение 1-2 недель после добавления антибиотика.


Влияние зеоцина на чувствительные и устойчивые клетки

Метод уничтожения зеоцина сильно отличается от других антибиотиков, включая бластицидин, неомицин и гигромицин. Клетки не округляются и не отделяются от пластины. Чувствительные клетки могут демонстрировать следующие морфологические изменения при воздействии зеоцина:

  • Значительное увеличение размера (аналогично эффектам цитомегаловируса, инфицирующего пермиссивные клетки)
  • Аномальная форма клеток
  • Наличие больших пустых пузырьков в цитоплазме (разрушение клеток). эндоплазматический ретикулум и аппарат Гольджи или другие каркасные белки)
  • Разрушение плазматической и ядерной мембран (появление множества отверстий в этих мембранах)
  • В конце концов, эти «клетки» полностью разрушатся, и останутся только «нити» белка.
  • Клетки, устойчивые к зеоцину, должны продолжать делиться через равные промежутки времени с образованием отдельных колоний. В клетках, устойчивых к зеоцину, не должно быть каких-либо явных морфологических изменений по сравнению с клетками, не подвергавшимися селекции с зеоцином. Для получения дополнительной информации о зеоцине и его механизме действия, пожалуйста, обратитесь к руководству по индуцибельному вектору экспрессии.


Возможные сайты для линеаризации pcDNA6 / TR

Для получения стабильных трансфектантов вы можете выбрать линеаризацию pcDNA6 / TR перед трансфекцией.Хотя линеаризация вектора не может повысить эффективность трансфекции, она увеличивает вероятность того, что вектор не интегрируется таким образом, который нарушает ген-репрессор Tet или другие элементы, необходимые для экспрессии в клетках млекопитающих. В таблице ниже перечислены уникальные сайты, которые можно использовать для линеаризации вашей конструкции перед трансфекцией. Возможны другие сайты ограничения.

Фермент

Место ограничения (bp)

Местоположение

Поставщик

Ist

4470

Магистраль

AGS * , Ферментас, Такара

Sap I

4733

Магистраль

Биолаборатории Новой Англии

Bsp LU11 I

4849

Магистраль

Берингер-Мангейм

Eam 1105 I

5739

Ген ампициллина

AGS * , Ферментас, Такара

Fsp I

5961

Ген ампициллина

Много


Отбор стабильных интегрантов

После того, как вы определили подходящие концентрации антибиотика для использования для отбора, вы можете создать стабильную клеточную линию, экспрессирующую pcDNA6 / TR, и вашу конструкцию индуцибельной экспрессии.

  1. Трансфекция клеток млекопитающих с pcDNA6 / TR с использованием желаемого протокола. Не забудьте включить планшет с нетрансфицированными клетками в качестве отрицательного контроля.

  2. Через 24 часа после трансфекции промойте клетки и добавьте к клеткам свежую среду.

  3. Через 48 часов после трансфекции разделите клетки на свежую среду, содержащую бластицидин в заранее определенной концентрации, необходимой для вашей клеточной линии. Разделите ячейки так, чтобы слияния ячеек составляло не более 25%.Если клетки слишком плотные, антибиотик не убьет клетки. Антибиотики лучше всего действуют на активно делящиеся клетки.

  4. Подкармливайте клетки селективной средой каждые 3-4 дня до выявления очагов.

  5. Выберите не менее 20 фокусов и увеличьте их, чтобы проверить экспрессию гена, индуцируемого тетрациклином, путем временной трансфекции плазмидой положительного контроля, экспрессирующей бета-галактозидазу. Скрининг для тех клонов, которые демонстрируют самые низкие уровни базовой транскрипции и самые высокие уровни экспрессии β-галактозидазы после добавления тетрациклина.

  6. После того, как вы получили стабильную клеточную линию, экспрессирующую репрессор Tet, вы можете использовать эту клеточную линию для выделения стабильной клеточной линии, экспрессирующей ваш интересующий ген, из индуцибельной экспрессионной плазмиды. Повторите шаги с 1 по 4, описанные выше, используя конструкцию индуцируемого вектора экспрессии и зеоцин для выбора фокусов. Не забывайте поддерживать свои клетки в среде, содержащей бластицидин.

  7. Выберите и увеличьте по крайней мере 20 фокусов, чтобы проверить экспрессию гена, регулируемую тетрациклином.


Двойной отбор стабильных интегрантов

Мы рекомендуем использовать описанный выше протокол для создания линий двойных стабильных клеток. Однако, если вы хотите выполнить двойной отбор, вы можете котрансфицировать как pcDNA6 / TR, так и вашу индуцибельную экспрессионную конструкцию в выбранную линию клеток. При котрансфекции вашей клеточной линии мы рекомендуем использовать соотношение по крайней мере 6: 1 (мас. / Мас.) PcDNA6 / TR ДНК: индуцируемая экспрессирующая плазмидная ДНК, чтобы повысить шансы того, что ваши двойные стабильные клеточные линии будут экспрессировать достаточные уровни репрессора Tet.Следуя шагам, перечисленным выше, добавьте селективную среду, содержащую бластицидин и зеоцин в концентрациях, определенных ранее. Проверьте по крайней мере 40 очагов на предмет регулируемой тетрациклином экспрессии интересующего вас гена, используя соответствующий анализ для вашего белка (например, вестерн-блоттинг, ферментативный анализ).

После того, как вы изолировали стабильные клеточные линии, экспрессирующие как pcDNA6 / TR , так и вашу индуцибельную экспрессирующую конструкцию, и проверили индуцируемую тетрациклином экспрессию интересующего вас гена, мы рекомендуем вам выполнить временной график индукции тетрациклином для оптимизации экспрессия интересующего вас белка (например,грамм. 0, 8, 16, 24, 32 часа и т. Д.). Используйте соответствующую концентрацию тетрациклина для вашей клеточной линии, как было определено ранее. Мы наблюдали 120-кратную индукцию β-галактозидазы в двойной стабильной клеточной линии (клетки T-REx 293, трансфицированные плазмидой положительного контроля, содержащей ген lacZ) после 24 часов обработки тетрациклином 1 мкг / мл. Обратите внимание, что ваши уровни индукции могут варьироваться в зависимости от природы интересующего вас гена и конкретного клона, который вы выбираете.

Карта pcDNA6 / TR

pcDNA6 / TR представляет собой вектор длиной 6662 п.н., который экспрессирует репрессор Tet под контролем промотора CMV человека. Рисунок, обобщающий характеристики этого вектора, можно скачать, щелкнув здесь. Полную последовательность для pcDNA6 / TR можно загрузить с сайта www.thermofisher.com или обратившись в службу технической поддержки.

Ген TetR

Ген TetR, используемый в pcDNA6 / TR, был первоначально выделен из транспозона Tn10, который придает устойчивость к тетрациклину у E.coli и другие кишечные бактерии (Postle et al., 1984). Ген TetR из Tn10 кодирует репрессор Tet класса B и в литературе часто упоминается как TetR (B) (Hillen and Berens, 1994).

Ген TetR кодирует белок-репрессор из 207 аминокислот с расчетной молекулярной массой 23 кДа. Для получения дополнительной информации о репрессоре Tet и его взаимодействии с оператором Tet, пожалуйста, обратитесь к обзору Hillen and Berens (1994).

Характеристики pcDNA6 / TR

В таблице ниже описаны соответствующие функции pcDNA6 / TR.Вектор включает интрон II β-глобина кролика для усиления экспрессии гена TetR. Более подробное описание гена TetR и репрессора Tet см. На предыдущей странице. Все функции функционально протестированы.

Характеристика Преимущество
Ранний промотор цитомегаловируса человека (CMV)

Обеспечивает экспрессию гена TetR на высоком уровне (Andersson et al., 1989; Boshart et al., 1985; Nelson et al., 1987)

Интрон II β-глобина кролика (IVS) Усиливает экспрессию гена Tet R (van Ooyen et al. , 1979) в культивируемых клетках
Ген Tet R Кодирует репрессор Tet, который связывается с последовательностями операторов tet для подавления транскрипции интересующего гена в отсутствие тетрациклина (Postle et al. , 1984; Yao et al. , 1998 )
Сигнал раннего полиаденилирования SV40 Обеспечивает эффективную терминацию транскрипции и полиаденилирование мРНК
Происхождение f1 Позволяет спасать одноцепочечную ДНК
SV40 ранний промотор и источник Обеспечивает эффективный, высокоэффективный уровень экспрессии гена устойчивости к бластицидину в клетках млекопитающих и эписомальная репликация в клетках, экспрессирующих большой Т-антиген SV40
EM7 промотируют r Синтетический прокариотический промотор для экспрессии гена устойчивости к бластицидину в E.coli
Ген устойчивости к бластицидину ( bsd ) Позволяет отобрать стабильные трансфектанты в клетках млекопитающих (Kimura et al., 1994)
Сигнал раннего полиаденилирования SV40 Обеспечивает эффективную терминацию транскрипции и полиаденилирование мРНК
происхождение pUC Обеспечивает репликацию с высоким числом копий и рост в промоторе E. coli
bla промотор Обеспечивает экспрессию гена устойчивости к ампициллину ( bla )

Ампициллин ( bla ) ген устойчивости

(ß-лактамаза)

Позволяет выбрать трансформанты в E.coli

Бластицидин S HCl — это нуклеозидный антибиотик, выделенный из Streptomyces griseochromogenes, который ингибирует синтез белка как в прокариотических, так и в эукариотических клетках (Takeuchi et al., 1958; Yamaguchi et al., 1965). Устойчивость обеспечивается экспрессией одного из двух генов бластицидин S дезаминазы: bsd из Aspergillus terreus (Kimura et al., 1994) или bsr из Bacillus cereus (Izumi et al., 1991). Эти дезаминазы превращают бластицидин S в нетоксичное деаминогидроксипроизводное (Izumi et al., 1991).

Молекулярная масса, формула и структура

Формула бластицидина S: C17h36N8O5-HCl, а молекулярная масса составляет 458,9. На диаграмме ниже показана структура бластицидина.

Обращение с бластицидином

При работе с бластицидином всегда надевайте перчатки, маску, очки и защитную одежду (например, лабораторный халат). Взвесьте бластицидин и приготовьте растворы в вытяжном шкафу.

Приготовление и хранение исходных растворов

Бластицидин поставляется в комплекте T-REx Complete Kit, но также может быть получен отдельно от Invitrogen (номер по каталогу.R210-01) аликвотами по 50 мг. Бластицидин растворим в воде. Стерильная вода обычно используется для приготовления исходных растворов от 5 до 10 мг / мл.

  • Растворите бластицидин в стерильной воде и стерилизуйте раствор фильтрованием.
  • Аликвоты в небольших объемах, подходящих для одноразового использования (см. Предпоследний пункт ниже), заморозить при -20 ° C для длительного хранения или хранить при + 4 ° C для краткосрочного хранения.
  • Водные маточные растворы стабильны в течение 1-2 недель при + 4 ° C и 6-8 недель при -20 ° C.
  • pH водного раствора должен составлять 7,5, чтобы предотвратить инактивацию бластицидина.
  • Не подвергайте исходные растворы циклам замораживания / оттаивания (не храните в морозильной камере).
  • После размораживания используйте то, что вам нужно, и храните размороженный основной раствор при + 4 ° C до 2 недель.
  • Содержит бластицидин, может храниться при + 4 ° C до 2 недель.
  1. Abruzzese, R.V, Godin, D., Burcin, M., Mehta, V., French, M., Li, Y., O’Malley, B.W., and Nordstrom, J.Л. (1999). Лиганд-зависимая регуляция экспрессии плазмидных трансгенов in vivo. Генная терапия человека 10, 1499-1507.

  2. Осубель, Ф. М., Брент, Р., Кингстон, Р. Э., Мур, Д. Д., Сейдман, Дж. Г., Смит, Дж. А. и Струл, К. (1994). Текущие протоколы в молекулярной биологии (Нью-Йорк: Greene Publishing Associates и Wiley-Interscience).

  3. Baeuerle, P. A. (1991). Индуцибельный активатор транскрипции NF-каппа B: регулирование отдельными белковыми субъединицами. Биохим. Биофиз.Acta 1072, 63-80.

  4. Baeuerle, P. A., and Baltimore, D. (1988). I Каппа B: специфический ингибитор фактора транскрипции NF-каппа B. Science 242, 540-546.

  5. Барон М., Рейнс Дж. П., Стасси Д. и Тираби Г. (1992). Селективная бифункциональная b-галактозидаза: слитый белок устойчивости к флеомицину как потенциальный маркер для эукариотических клеток. Gene 114, 239-243.

  6. Болье, Э. Э. (1989). Противопоказание и другие клинические применения RU486, антипрогестерона на рецепторе.Science 245, 1351-1357.

  7. Бурчин М. М., Шиднер Г., Кочанек С., Цай С. Ю. и О’Мэлли Б. В. (1999). Экспрессия регулируемого гена-мишени, опосредованная аденовирусом, in vivo. Proc. Natl. Акад. Sci. США 96, 355-360.

  8. Calmels, T., Parriche, M., Burand, H., and Tiraby, G. (1991). Высокая эффективность трансформации конидиоспор Tolypocladium gedes в резистентность к флеомицину. Curr. Genet. 20, 309-314.

  9. Кэри, М., Какидани, Х., Лезервуд, Дж., Мосташари, Ф., и Пташне, М. (1989). Амино-концевой фрагмент GAL4 связывает ДНК в виде димера. J. Mol. Биол. 209, 423-432.

  10. Chen, C., и Okayama, H. (1987). Высокоэффективная трансформация клеток млекопитающих плазмидной ДНК. Мол. Клетка. Биол. 7, 2745-2752.

  11. Чу Г., Хаякава Х. и Берг П. (1987). Электропорация для эффективной трансфекции клеток млекопитающих ДНК. Nucleic Acids Res. 15, 1311–1326.

  12. ДеФранко, Д. Б. (1998) Субклеточный и субядерный трафик стероидных рецепторов.В молекулярной биологии рецепторов стероидов и ядерных гормонов, Л. П. Фридман, изд. (Бостон, Массачусетс: Birkhauser), стр. 19-34.

  13. Делукас П. и Лун А. П. В. (1993). Геномная организация гена, кодирующего субъединицу p65 NF-каппа B: множественные варианты белка p65 могут быть созданы с помощью альтернативного сплайсинга. Гм. Мол. Genet. 2, 1895-1900 гг.

  14. Drocourt, D., Calmels, T. P. G., Reynes, J. P., Baron, M., and Tiraby, G. (1990). Кассеты гена Streptoalloteichus hindustanus ble для трансформации низших и высших эукариот к устойчивости к флеомицину.Nucleic Acids Res. 18, 4009.

  15. Эванс Р. М. (1988). Суперсемейство рецепторов стероидов и гормонов щитовидной железы. Science 240, 889-895.

  16. Felgner, P. L., Holm, M., and Chan, H. (1989). Трансфекция, опосредованная катионными липосомами. Proc. Запад. Pharmacol. Soc. 32, 115-121.

  17. Фельгнер П. Л. и Рингольд Г. М. (1989). Трансфекция, опосредованная катионными липосомами. Nature 337, 387-388.

  18. Gasc, J. M., Delahaye, F., and Baulieu, E. E. (1989). Сравнение внутриклеточной локализации рецепторов глюкокортикостероидов и прогестерона: иммуноцитохимическое исследование.Exp. Cell Res. 181, 492-504.

  19. Гинигер Э., Варнум С. М. и Пташне М. (1985). Специфическое связывание ДНК GAL4, положительного регулирующего белка дрожжей. Cell 40, 767-774.

  20. Гудвин, Э. К. и Роттман, Ф. М. (1992). 3′-фланкирующая последовательность гена гормона роста крупного рогатого скота содержит новые элементы, необходимые для эффективного и точного полиаденилирования. J. Biol. Chem. 267, 16330–16334.

  21. Гриц, Л., и Дэвис, Дж. (1983). Закодированная плазмидой устойчивость к гигромицину-B: последовательность гена гигромицин-B-фосфотрансферазы и его экспрессия в E.coli и S. cerevisiae. Gene 25, 179–188.

  22. Guiochon-Mantel, A., Loosfelt, H., Lescop, P., Sar, S., Atger, M., Perrot-Applanat, M., and Milgrom, E. (1989). Механизмы ядерной локализации рецептора прогестерона: доказательства взаимодействия между мономерами. Cell 57, 1147-1154.

  23. Кастнер, П., Краст, А., Тюркотт, Б., Стропп, У., Тора, Л., Гронемейер, Х., и Шамбон, П. (1990). Два разных промотора, регулируемых эстрогеном, генерируют транскрипты, кодирующие две функционально разные формы рецепторов прогестерона человека A и B.EMBO J. 9, 1603-1614.

  24. Киган Л., Гилл Г. и Пташне М. (1986). Отделение связывания ДНК от функции активации транскрипции регулирующего белка эукариот. Наука 231, 699-704.

  25. Козак М. (1987). Анализ 5´-некодирующих последовательностей из 699 матричных РНК позвоночных. Nucleic Acids Res. 15, 8125-8148.

  26. Козак М. (1991). Анализ последовательностей мРНК позвоночных: признаки трансляционного контроля. J. Cell Biology 115, 887-903.

  27. Козак М. (1990). Вторичная структура, расположенная ниже по течению, облегчает распознавание кодонов инициатора эукариотическими рибосомами. Proc. Natl. Акад. Sci. USA 87, 8301-8305.

  28. Laughon, A., and Gesteland, R.F. (1984). Первичная структура гена GAL4 Saccharomyces cerevisiae. Мол. Клетка. Биол. 4, 260-267.

  29. Лилли, Дж. У. и Грин, М. Р. (1989). Активация транскрипции белком аденовируса E1a. Природа 338, 39-44.

  30. Линднер П., Бауэр К., Krebber, A., Nieba, L., Kremmer, E., Krebber, C., Honegger, A., Klinger, B., Mocikat, R., and Pluckthun, A. (1997). Специфическое обнаружение His-меченых белков с помощью рекомбинантной анти-His-метки scFv-фосфатазы или слияния scFv-фага. BioTechniques 22, 140-149.

  31. Марморштейн Р., Кэри М., Пташне М. и Харрисон С. С. (1992). Распознавание ДНК по GAL4: структура комплекса белок-ДНК. Nature 356, 408-414.

  32. McKnight, S. L. (1980). Нуклеотидная последовательность и карта транскриптов гена тимидинкиназы вируса простого герпеса.Nucleic Acids Res. 8, 5949-5964.

  33. Миллер Дж. Х. (1972). Эксперименты в молекулярной генетике (Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк: Лаборатория Колд-Спринг-Харбор).

  34. Мисрахи, М., Атгер, М., д’Ориоль, Л., Лосфельт, Х., Мериэль, К., Фридлански, Ф., Гиошон-Мантель, А., Галиберт, Ф., и Милгром, Э. (1987). Полная аминокислотная последовательность рецептора прогестерона человека, полученная из клонированной кДНК. Biochem. Биофиз. Res. Commun. 143, 740-748.

  35. Mulsant, P., Tiraby, G., Каллерхофф Дж. И Перре Дж. (1988). Устойчивость к флеомицину как доминантный селектируемый маркер в клетках СНО. Сомат. Cell Mol. Genet. 14, 243–252.

  36. Нельсон, М., и Сильвер, П. (1989). Контекст влияет на локализацию ядерных белков в Saccharomyces cerevisiae. Мол. Клетка. Биол. 9, 384-389.

  37. Палмер Т. Д., Хок Р. А., Осборн В. Р. А. и Миллер А. Д. (1987). Эффективный ретровирус-опосредованный перенос и экспрессия гена аденозиндезаминазы человека в диплоидных фибробластах кожи человека с дефицитом аденозина.Proc. Natl. Акад. Sci. США 84, 1055-1059.

  38. Perez, P., Tiraby, G., Kallerhoff, J., and Perret, J. (1989). Устойчивость к флеомицину как доминирующий селектируемый маркер трансформации растительных клеток. Завод Мол. Биол. 13, 365-373.

  39. Perrot-Applanat, M., Logeat, F., Groyer-Picard, M. T., and Milgrom, E. (1985). Иммуноцитохимическое исследование рецептора прогестерона млекопитающих с использованием моноклональных антител. Эндокринол. 116, 1473–1484.

  40. Филибер, Д., Могилевский, М., Мэри, И., Лекак, Д., Турнемин, К., Секки, Дж., И Дераэдт, Р. (1985). В статье «Антипрогестиновый стероид RU486 и контроль фертильности человека», E. E. Baulieu и S. J. Segal, eds. (Нью-Йорк: Пленум), стр. 49-68.

  41. Рубен, С. М., Диллон, П. Дж., Шрек, Р., Хенкель, Т., Чен, К. Х., Махер, М., Бауэрле, П. А., и Розен, К. А. (1991). Выделение Rel-родственной кДНК человека, которая потенциально кодирует субъединицу 65 кДа NF-каппа B. Science 251, 1490-1493.

  42. Sambrook, J., Fritsch, E.Ф. и Маниатис Т. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition (Plainview, New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press).

  43. Schmitz, M. L., and Baeuerle, P. A. (1991). Субъединица p65 отвечает за сильный потенциал активации транскрипции NF-каппа B. EMBO J. 10, 3805-3817.

  44. Shigekawa, K., and Dower, W. J. (1988). Электропорация эукариот и прокариот: общий подход к введению макромолекул в клетки.BioTechniques 6, 742-751.

  45. Simons, S. S., Jr. (1998) Структура и функция стероидного и ядерного рецепторного лиганд-связывающего домена. В молекулярной биологии рецепторов стероидов и ядерных гормонов, Л. П. Фридман, изд. (Бостон, Массачусетс: Birkhauser), стр. 35-104.

  46. Саузерн, Дж. А., Янг, Д. Ф., Хини, Ф., Баумгартнер, В., и Рэндалл, Р. Э. (1991). Идентификация эпитопа на белках P и V обезьяньего вируса 5, который различает два изолята с разными биологическими характеристиками.J. Gen. Virol. 72, 1551–1557.

  47. Трасс, М., и Беато, М. (1993). Рецепторы стероидных гормонов: взаимодействие с дезоксирибонуклеиновой кислотой и факторами транскрипции. Endocr. Ред. 14, 459-479.

  48. Вегето, Э., Аллан, Г. Ф., Шредер, В. Т., Цай, М. Дж., Макдоннелл, Д. П. и О’Мэлли, Б. В. (1992). Механизм антагонизма RU486 зависит от конформации карбоксиконцевого хвоста рецептора прогестерона человека. Cell 69, 703-713.

  49. Ван, Ю., B.W. О’Мэлли, Дж., Цай, С. Ю., О’Мэлли, Б. У. (1994). Нормативная система для использования в передаче генов. Proc. Natl. Акад. Sci. USA 91, 8180-8184.

  50. Ван, Ю., Сюй, Дж., Пирсон, Т., О’Мэлли, Б. В., и Цай, С. Ю. (1997). Положительная и отрицательная регуляция экспрессии генов в эукариотических клетках с помощью индуцируемого регулятора транскрипции. Генная терапия 4, 432-441.

  51. Wigler, M., Silverstein, S., Lee, L.-S., Pellicer, A., Cheng, Y.-C., and Axel, R. (1977). Перенос очищенного гена тимидинкиназы вируса герпеса в культивируемые мышиные клетки.Cell 11, 223-232.

  52. Ylikomi, T., Bocquel, M. T., Berry, M., Gronemeyer, H., and Chambon, P. (1992). Сотрудничество прото-сигналов для ядерного накопления рецепторов эстрогена и прогестерона. EMBO J. 11, 3681-3694.


LT054

Anti-TetR-антитело (ab25845) | Abcam

Обзор

  • Название продукта

    Антитело против TetR

  • Описание

    Кролик поликлональный по TetR

  • Вид-хозяин

    Кролик

  • Специфичность

    Это антитело обнаруживает белок-репрессор Tet.Белок-репрессор Tet регулирует транскрипцию семейства детерминант устойчивости к тетрациклину у грамотрицательных бактерий. Система Tet — это наиболее широко используемая регуляторная система для условной экспрессии генов в эукариотических клетках. TetR может использоваться для этой цели у некоторых организмов без дальнейших модификаций. Однако у млекопитающих и большого числа других организмов активатор или репрессор транскрипции эукариот домены сливаются с TetR, чтобы превратить его в эффективный регулятор.

  • Протестированные приложения

  • Реактивность видов

    Реагирует с: Независимые виды

  • Иммуноген

    Рекомбинантный фрагмент:

    AQKLGVEQPTLYWHVKNKR

    , соответствующий аминокислотам 31-49 в TetR
  • Общие примечания

    Отрасль наук о жизни уже несколько лет находится в тисках кризиса воспроизводимости.Abcam лидирует в решении этой проблемы, предлагая ассортимент рекомбинантных моноклональных антител и клеточных линий, отредактированных с помощью нокаута, для проверки на соответствие золотому стандарту. Перед покупкой убедитесь, что этот продукт соответствует вашим потребностям.

    Если у вас есть какие-либо вопросы, особые требования или проблемы, отправьте нам запрос и / или свяжитесь с нашей службой поддержки перед покупкой. Ниже приведены рекомендуемые альтернативы для этого продукта вместе с публикациями, отзывами клиентов и вопросами и ответами

    .

Недвижимость

  • Форма

    Жидкость

  • Инструкция по хранению

    Поставляется при 4 ° C.Хранить при + 4 ° C кратковременно (1-2 недели). При доставке аликвота. Хранить при -20 ° C или -80 ° C. Избегайте цикла замораживания / оттаивания.

  • Буфер памяти

    pH: 7,4
    Консервант: 0,02% азид натрия
    Состав: PBS, 0,1% BSA

  • Загрузка информации о концентрации …
  • Чистота

    Аффинно очищенный иммуноген

  • Клональность

    Поликлональный

  • Изотип

    IgG

  • Направления исследований

Сопутствующие товары

  • Совместимые вторичные компоненты

  • Изотипический контроль

Приложения

Гарантия Abpromise

Наша гарантия Abpromise распространяется на использование ab25845 в следующих протестированных приложениях.

Примечания по применению включают рекомендуемые начальные разведения; Оптимальные разведения / концентрации должны определяться конечным пользователем.

Заявка Отзывы Банкноты
WB (1)

Используйте концентрацию 1 мкг / мл. Расчетная молекулярная масса: 24 кДа.

Примечания

WB
Используйте концентрацию 1 мкг / мл. Расчетная молекулярная масса: 24 кДа.

Цель

  • Соответствие

    TetR (Tet Repressor Protein) регулирует транскрипцию семейства детерминант устойчивости к тетрациклину у грамотрицательных бактерий.Система Tet — это наиболее широко используемая регуляторная система для условной экспрессии генов в эукариотических клетках. TetR может использоваться для этой цели у некоторых организмов без дальнейших модификаций. Однако у млекопитающих и большого количества других организмов эукариотические домены активатора транскрипции или репрессора сливаются с TetR, чтобы превратить его в эффективный регулятор.

  • Альтернативные названия

    • pSC101 tetR антитело
    • Антитело к белку-репрессору Tet
    • Антитело к репрессорному белку тетрациклина
    • Тетрациклиновый репрессорный белок класса А из антитела транспозона 1721
    • Тетрациклиновый репрессорный белок класса B из антитела к транспозону Tn10
    • Антитело класса C к репрессорному белку тетрациклина
    • Антитело класса D к репрессорному белку тетрациклина
    • Антитело класса Е к репрессорному белку тетрациклина

    посмотреть все

Паспорта и документы

  • SDS скачать

    Страна / регион Выберите страну / регион

    Язык Выбор языка

  • Скачать брошюру

Список литературы (2)

ab25845 упоминается в 2 публикациях.

  • Fang Y et al. Последовательная терапия ингибиторами PARP и WEE1 сводит к минимуму токсичность, сохраняя при этом эффективность. Cancer Cell 35: 851-867.e7 (2019). PubMed: 31185210
  • Whetstine CR et al. Разработка регулируемой системы экспрессии генов на основе одной плазмиды для Borrelia burgdorferi. Appl Environ Microbiol 75: 6553-8 (2009). ВБ . PubMed: 19700541

Отзывы клиентов, вопросы и ответы

1 4 из 4 Обзоры или вопросы и ответы

Просмотров: 10Просмотров: 50Просмотров: 100Сортировать по: Наивысшим голосам Сортировать по: Наименьшим голосам Сортировать по: Новейшим Первым Сортировать: Старым Первым

Гель Рабочие условия

Сниженная денатурация (10% SDS PAGE)

Образец

Лизат тканей мыши — цельный (левый желудочек)

Спецификация

Левый желудочек

Лечение

Doxycycline Chow в течение 3 дней или 6 недель

Шаг блокировки

Молоко как блокирующий агент в течение 1 часа и 0 минут · Концентрация: 5% · Температура: 25 ° C

ДокторКрис Трейси

Проверенный клиент

Отправлено 02 янв 2015

Спасибо, что нашли время связаться с нами.Мне жаль слышать, что у вас возникли трудности с получением удовлетворительных результатов от этого антитела. Я ценю время, которое вы провели в лаборатории, и понимаю, что вас беспокоит. К сожалению, результаты не увенчались успехом. Прежде чем принять решение о дальнейших действиях, наша обычная процедура состоит в том, чтобы продолжить расследование этого конкретного случая для вас, а также получить дополнительную информацию для нашего контроля качества и записей. Для этого я приложил ниже анкету.Буду признателен, если вы сможете это завершить. Это поможет вам очень легко собрать необходимую нам информацию. Мы с радостью предложим техническую поддержку, и в случае, если продукт не работает в приложениях, указанных в технических характеристиках продукта (и о проблеме было сообщено в течение 6 месяцев с момента покупки), мы будем рады бесплатно предоставить кредит-ноту. замены заряда или возврата. Спасибо за ваше время и сотрудничество. Ждем заполненной анкеты. Информация для заказа Код антитела: Проблема Выберите: неспецифическая полоса Несколько полос Нет сигнала или слабый сигнал Высокий фон Большое число Номер заказа на закупку или предпочтительно номер заказа Abcam: Общая информация Условия хранения антител (температура / восстановление и т. Д.) Описание проблемы (высокий фон, неправильный размер полосы, больше полос, нет полосы и т. Д.) Образец (виды / клеточный экстракт / ядерный экстракт / очищенный белок / рекомбинантный белок и т. Д.) Подготовка образца (буфер / ингибиторы протеазы / образец для нагрева и т. Д.) Количество загруженного белком электрофореза / условия геля (восстанавливающий или невосстанавливающий гель,% геля и т. Д.) Условия передачи и блокировки (буфер / период времени, агент блокировки и т. Д.) Первичные антитела (производитель / виды / разбавитель / разведение / время инкубации, этап промывки) Вторичные антитела (производитель / виды / разбавитель / разведение / время инкубации, этап промывки) Метод обнаружения (ECL, ECLPlus и т. Д.) Использованные положительные и отрицательные контроли (просьба указать) Попытки оптимизации (решение проблемы) Сколько раз вы пробовали вестерн? Вы запускали элемент управления «Нет первичного»? да нет Получаете ли вы каждый раз одни и те же результаты? да нет например фоновые полосы всегда в одном и том же месте? Какие шаги вы изменили? Дополнительные замечания: Изображение: Мы были бы признательны, если бы вы могли предоставить изображение (включая маркеры молекулярной массы), которое поможет нам оценить результаты.

Подробнее

Сообщество Abcam

Проверенный клиент

На вопрос 12 мая 2006 г.

Спасибо за ваш запрос.В дополнение к нашему телефонному разговору сегодня утром, я был бы очень признателен, если бы вы предоставили мне дополнительную информацию о протоколе, который вы использовали, нажав на ссылку ниже и заполнив наш технический вопросник. Это позволит нашей технической группе лучше определить шаги, которые вы предприняли для оптимизации этого антитела. Было бы также наиболее информативно, если бы вы предоставили мне типичный блот и подробную информацию о номере партии. https: // www.abcam.com/index.html?section=western&pageconfig=technical&intAbID=25845&mode=questionaire С нетерпением жду Вашего ответа.

Подробнее

Мне сообщили, что иммуногеном для этого антитела являются аминокислоты 31-49 (AQKLGVEQPTLYWHVKNKR) из Tet белок-репрессор (приношу свои извинения за неверную информацию в таблице данных, в которой говорится, что это был весь белок, это было немедленно исправлено).Эта последовательность присутствует во всех известных классах TetR, поэтому мы ожидаем, что это антитело распознает ваш белок tTS-TetR. Надеюсь, эта информация вам поможет,

Подробнее

ЖУРНАЛ ПАТЕНТНОГО БЮРО — Ирландское патентное ведомство

  • Стр. 2 и 3: Журнал публикуется две недели.
  • Стр. 4 и 5: 2235 (10.04.2006) Патентное ведомство Jo
  • Стр. 6 и 7: 2237 (04/10 / 2006) Патентное бюро Jo
  • Стр. 8 и 9: 2239 (10.04.2006) Патентное бюро Jo
  • Стр.10 и 11: 2241 (10.04.2006) Патентное бюро Jo
  • Стр. 12 и 13: 2243 (10.04.2006) Патентное бюро Jo
  • стр. 14 и 15: 2245 (10.04.2006) Патентное ведомство Jo
  • стр. 16 и 17: 2247 (04.10.2006) Патентное ведомство Jo
  • стр. 18 и 19: 2249 (10.04.2006) Патентное бюро Джо
  • Стр. 20 и 21: 2251 (10.04.2006) Патентное ведомство Джо
  • Стр. 22 и 23: 2253 (10.04.2006) Патентное ведомство Джо
  • Стр. 24 и 25: 2255 (04.10.2006) Патентное бюро Jo
  • Стр. 26 и 27: 2257 (04.10.2006) Патентное ведомство Jo
  • Стр. 28 и 29: 2259 (04.10.2006 ) Патентное бюро Jo
  • , стр.30 и 31: 2261 (10.04.2006) Патентное бюро Jo
  • Стр. 32 и 33: 2263 (10.04.2006) Патентное бюро Jo
  • Стр. 34 и 35: 2265 (04/10/2006) Патентное бюро Jo
  • Стр. 36 и 37: 2267 (04 / 10/2006) Патентное бюро Jo
  • Стр. 38 и 39: 2269 (04/10/2006) Патентное бюро Jo
  • Стр. 40 и 41: 2271 (04/10/2006) Патентное бюро Jo
  • Стр. 42 и 43: 2273 (10.04.2006) Патентное бюро Jo
  • Стр. 44 и 45: 2275 (10.04.2006) Патентное бюро Jo
  • Стр. 46 и 47: 2277 (04/10/2006) Патентное бюро Jo
  • Стр. 48 и 49: 2279 (10.04.2006) Патентное бюро Jo
  • Стр. 50 и 51: 2281 (10.04.2006) Патентное бюро Jo
  • Стр. 52 и 53:

    2283 (10.04.2006) Патенты Офис Jo

  • Страница 54 и 55:

    2285 (10.04.2006) Патентный офис Jo

  • Страница 56 и 57:

    2287 (04.10.2006) Патентный офис Jo

  • Стр.58 и 59:

    2289 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Pa ge 60 и 61:

    2291 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • стр.62 и 63:

    2293 (10.04.2006) Патентное ведомство Jo

  • стр.64 и 65:

    2295 (04 / 10/2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 66 и 67:

    2297 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 68 и 69:

    2299 (04.10.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 70 и 71:

    2301 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 72 и 73:

    2303 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 74 и 75:

    2305 (04 / 10/2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 76 и 77:

    2307 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 78 и 79:

    2309 (04.10.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр. 80 и 81:

    2311 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр. 82 и 83:

    2313 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр. 84 и 85:

    2315 (04 / 10/2006) Патентный офицер e Jo

  • Страница 86 и 87:

    2317 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 88 и 89:

    2319 (04.10.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 90 и 91:

    2321 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • стр.92 и 93:

    2323 (10.04.2006) Патентное ведомство Jo

  • стр.94 и 95:

    2325 (04.10.2006) Патенты Офис Jo

  • Страница 96 и 97:

    2327 (10.04.2006) Патентный офис Jo

  • Страница 98 и 99:

    2329 (04.10.2006) Патентный офис Jo

  • Страница 100 и 101:

    2331 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр.102 и 103:

    2333 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр.104 и 105:

    2335 (10.04.2006) Патенты Офис Джо

  • Стр.106 и 107:

    2337 (10.04.2006) Патентный Офис Джо

  • Стр.108 и 109:

    2339 (10.04.2006) Патентный Офис Джо

  • Стр 110 и 111:

    2341 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр. 112 и 113:

    2343 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр. 114 и 115:

    2345 (10.04.2006) Патенты Офис Jo

  • Страница 116 и 117:

    2347 (10.04.2006) Патентный офис Jo

  • Страница 118 и 119:

    2349 (04.10.2006) Патентный офис Jo

  • Страницы 120 и 121:

    2351 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • стр.122 и 123:

    2353 (10.04.2006) Патентное ведомство Jo

  • стр.124 и 125:

    2355 (10.04.2006) Патенты Office Jo

  • Страница 126 и 127:

    2357 (04/10/2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 128 и 129:

    2359 (04/10/2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 130 и 131:

    2361 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • стр. 132 и 133:

    2363 (10.04.2006) Патентное ведомство Jo

  • стр. 134 и 135:

    2365 (10.04.2006) Pa палатки Офис Jo

  • Страница 136 и 137:

    2367 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 138 и 139:

    2369 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 140 и 141 :

    2371 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • стр. 142 и 143:

    1667 (10.04.2006) Патентное ведомство Jo

  • стр. 144 и 145:

    1669 (10.04.2006) Патентное бюро Джо

  • Стр. 146 и 147:

    1671 (10.04.2006) Патентное бюро Джо

  • Стр. 148 и 149:

    1673 (10.04.2006) Патентное бюро Джо

  • Стр. 150 и 151 :

    1675 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • стр. 152 и 153:

    1677 (10.04.2006) Патентное ведомство Jo

  • стр. 154 и 155:

    1679 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр. 156 и 157:

    1681 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр. 158 и 159:

    1683 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 160 и 161:

    1685 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 162 и 163:

    1687 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 164 и 165:

    1689 (04 / 10/2006) Патентное бюро Jo

  • Стр. 166 и 167:

    1691 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр. 168 и 169:

    1693 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 170 и 171:

    1695 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 172 и 173:

    1697 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 174 и 175:

    1699 (04 / 10/2006) Патентное бюро Jo

  • Стр.176 и 177:

    1701 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр. 178 и 179:

    1703 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 180 и 181:

    1705 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 182 и 183:

    1707 (04.10.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 184 и 185: 9 1693 1709 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр.186 и 187:

    1711 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр.188 и 189:

    1713 (04.10.2006) Патенты Офис Джо

  • Стр.190 и 191:

    1715 (10.04.2006) Патентное бюро Джо

  • Стр.192 и 193:

    1717 (10.04.2006) Патентное бюро Джо

  • Стр 194 и 195:

    1719 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр. 196 и 197:

    1721 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр.198 и 199:

    1723 (10.04.2006) Патенты Офис Jo

  • Страница 200 и 201:

    1725 (10.04.2006) Патентный офис Jo

  • Страница 202 и 203:

    1727 (04.10.2006) Патентный офис Jo

  • Страница 204 и 205:

    1729 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр. 206 и 207:

    1731 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр.208 и 209:

    1733 (10.04.2006) Патент ts Office Jo

  • Страница 210 и 211:

    1735 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 212 и 213:

    1737 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Страница 214 и 215 :

    1739 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • , стр. 216 и 217:

    1741 (10.04.2006) Патентное ведомство Jo

  • , стр. 218 и 219:

    1743 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр. 220 и 221:

    1745 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр. 222 и 223:

    1747 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр. 224 и 225 :

    1749 (10.04.2006) Патентное бюро Джо

  • Стр. 226 и 227:

    1751 (10.04.2006) Патентное ведомство Джо

  • Стр. 228 и 229:

    1753 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр. 230 и 231:

    1755 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • Стр. 232 и 233:

    1757 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

  • 9 0009 Страница 234:

    1759 (10.04.2006) Патентное бюро Jo

    Резолюция NCVCE | Избиратели Северной Каролины за чистые выборы

    Показать 20 | 50 | 100 | 200 | 500 | 1000 | Все результаты на странице.31955 результатов всего.2323 900
    # Отправлено Пользователь IP-адрес Операции
    8269 02.05.2018 — 17:32 Анонимный 5.101.64.74
    8270 02.05.2018 — 17:37 Аноним 5.101.64.76 Просмотр
    8271 02.05.2018 — 17:39 Аноним 5.101.64.76 Просмотр
    8272 02.05.2018 — 17:44 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8273 02.05.2018 — 17:49 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8274 02.05.2018 — 17:50 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8275 02.05.2018 — 17:53 Аноним 5.101.64.74 Просмотр
    8276 02.05.2018 — 17:56 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8277 02.05.2018 — 17:57 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8278 02.05.2018 — 17:59 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8279 02.02.2018 — 17:59 Аноним 5.101.64.74 Просмотр
    8280 02.05.2018 — 18:02 Анонимный 37.9.41.33 Просмотр
    8281 02.05.2018 — 18:02 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8282 02.05.2018 — 18:02 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8283 02.05.2018 — 02.05.2018 18:15 Аноним 5.101.64.76 Просмотр
    8284 02.05.2018 — 18:16 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8285 02.05.2018 — 18:16 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8286 02.05.2018 — 18:17 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8287 02.05.2018 — 18:17 Аноним 5.101.64.74 Просмотр
    8288 02.05.2018 — 18:23 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8289 02.05.2018 — 18:25 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8290 02.05.2018 — 18:34 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8291 02.05.2018 — 18:36 Аноним 5.101.64.76 Просмотр
    8292 02.05.2018 — 18:39 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8293 02.05.2018 — 19:02 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8294 02.05.2018 — 19:03 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8295 02.05.2018 — 02.05.2018 19:03 Аноним 5.101.64.74 Просмотр
    8296 02.05.2018 — 19:05 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8297 02.05.2018 — 19:05 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8298 02.05.2018 — 19:12 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8299 02.05.2018 — 19:12 Аноним 5.101.64.76 Просмотр
    8300 02.05.2018 — 19:12 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8301 02.05.2018 — 19:19 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8302 02.05.2018 — 19:22 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8303 02.02.2018 — 19:24 Аноним 5.101.64.76 Просмотр
    8304 02.05.2018 — 19:30 Анонимный 79.133.107.74 Просмотр
    8305 02.05.2018 — 19:31 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8306 02.05.2018 — 19:34 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8307 02.02.2018 — 19:35 Аноним 5.101.64.76 Просмотр
    8308 02.05.2018 — 19:36 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8309 02.05.2018 — 19:38 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8310 02.05.2018 — 19:39 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8311 02.05.2018 — 19:40 Аноним 5.101.64.76 Просмотр
    8312 02.05.2018 — 19:46 Анонимный 91.216.3.182 Просмотр
    8313 02.05.2018 — 19:54 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8314 02.05.2018 — 19:54 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8315 02.05.2018 — 19:55 Аноним 5.101.64.74 Просмотр
    8316 02.05.2018 — 19:55 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8317 02.05.2018 — 19:56 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8318 02.05.2018 — 19:56 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8319 02.05.2018 — 20:01 Аноним 91.216.3.137 Просмотр
    8320 02.05.2018 — 20:01 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8321 02.05.2018 — 20:12 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8322 02.05.2018 — 20:15 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8323 02.02.2018 — 20:15 Аноним 5.101.64.74 Просмотр
    8324 02.05.2018 — 20:15 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8325 02.05.2018 — 20:20 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8326 02.05.2018 — 20:30 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8327 02.02.2018 — 20:33 Аноним 5.101.64.74 Просмотр
    8328 02.05.2018 — 20:38 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8329 02.05.2018 — 20:39 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8330 02.05.2018 — 20:39 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8331 02.05.2018 — 20:40 Аноним 5.101.64.76 Просмотр
    8332 02.05.2018 — 20:42 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8333 02.05.2018 — 20:44 Анонимный 5.62.157.181 Просмотр
    8334 02.05.2018 — 20:45 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8335 02.05.2018 — 20:54 Аноним 5.101.64.74 Просмотр
    8336 02.05.2018 — 20:59 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8337 02.05.2018 — 21:03 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8338 02.05.2018 — 21:06 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8339 02/02/2018 21:14 Аноним 5.101.64.74 Просмотр
    8340 02.05.2018 — 21:19 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8341 02.05.2018 — 21:21 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8342 02.05.2018 — 21:21 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8343 02.05.2018 — 02.05.2018 21:24 Аноним 5.101.64.74 Просмотр
    8344 02.05.2018 — 21:25 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8345 02.05.2018 — 21:26 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8346 02.05.2018 — 21:37 Анонимный 193.93.194.117 Просмотр
    8347 — 02.05.2018 21:38 Аноним 5.101.64.76 Просмотр
    8348 02.05.2018 — 21:38 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8349 02.05.2018 — 21:38 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8350 02.05.2018 — 21:45 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8351 02.05.2018 — 21:50 Аноним 5.101.64.74 Просмотр
    8352 02.05.2018 — 21:57 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8353 02.05.2018 — 21:58 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8354 02.05.2018 — 21:58 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8355 02.05.2018 — 02.05.2018 21:58 Аноним 5.101.64.76 Просмотр
    8356 02.05.2018 — 22:04 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8357 02.05.2018 — 22:04 Анонимный 5.8.37.55 Просмотр
    8358 02.05.2018 — 22:05 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8359 02.05.2018 — 22:07 Аноним 5.101.64.74 Просмотр
    8360 02.05.2018 — 22:14 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8361 02.05.2018 — 22:17 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8362 02.05.2018 — 22:26 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8363 02.05.2018 — 02.05.2018 22:28 Аноним 5.101.64.76 Просмотр
    8364 02.05.2018 — 22:36 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8365 02.05.2018 — 22:38 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8366 02.05.2018 — 22:44 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8367 02.05.2018 — 22:46 Аноним 5.101.64.70 Просмотр
    8368 02.05.2018 — 22:46 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8369 02.05.2018 — 22:48 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8370 02.05.2018 — 22:49 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8371 02.05.2018 — 22:56 Аноним 5.101.64.74 Просмотр
    8372 02.05.2018 — 22:58 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8373 02.05.2018 — 22:58 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8374 02.05.2018 — 22:58 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8375 02.05.2018 — 23:01 Аноним 5.101.64.70 Просмотр
    8376 02.05.2018 — 23:03 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8377 02.05.2018 — 23:03 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8378 02.05.2018 — 23:04 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8379 02/02/2018 23:08 Аноним 5.101.64.76 Просмотр
    8380 02.05.2018 — 23:08 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8381 02.05.2018 — 23:08 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8382 02.05.2018 — 23:12 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8383 02.05.2018 — 23:14 Аноним 5.101.64.74 Просмотр
    8384 02.05.2018 — 23:17 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8385 02.05.2018 — 23:20 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8386 02.05.2018 — 23:27 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8387 02.05.2018 — 02.05.2018 23:28 Аноним 5.101.64.74 Просмотр
    8388 02.05.2018 — 23:31 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8389 02.05.2018 — 23:33 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8390 02.05.2018 — 23:33 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8391 02.05.2018 — 23:34 Аноним 5.101.64.74 Просмотр
    8392 02.05.2018 — 23:36 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8393 02.05.2018 — 23:36 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8394 02.05.2018 — 23:37 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8395 02.05.2018 — 02.05.2018 23:43 Аноним 5.101.64.74 Просмотр
    8396 02.05.2018 — 23:43 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8397 02.05.2018 — 23:45 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8398 02.05.2018 — 23:46 Анонимный 5.101.64.74 Просмотр
    8399 02.05.2018 — 23:49 Аноним 5.101.64.76 Просмотр
    8400 02.05.2018 — 23:51 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8401 02.05.2018 — 23:54 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8402 02.05.2018 — 23:55 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8403 02.05.2018 — 23:55 Аноним 5.101.64.74 Просмотр
    8404 03.05.2018 — 00:03 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8405 03.05.2018 — 00:11 Анонимный 5.188.217.103 Просмотр
    8406 03.05.2018 — 00:13 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8407 03.03.2018 — 00:48 Аноним 5.101.64.76 Просмотр
    8408 03.05.2018 — 00:51 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8409 03.05.2018 — 01:05 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8410 03.05.2018 — 01:06 Анонимный 185.13.33.26 Просмотр
    8411 03.05.2018 — 01:20 Аноним 5.101.64.76 Просмотр
    8412 03.05.2018 — 01:22 Анонимный 46.161.62.218 Просмотр
    8413 03.05.2018 — 01:23 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8414 03.05.2018 — 01:27 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8415 03.03.2018 — 01:27 Аноним 5.101.64.76 Просмотр
    8416 03.05.2018 — 01:27 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8417 03.05.2018 — 01:30 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8418 03.05.2018 — 01:31 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8419 03.03.2018 — 01:36 Аноним 5.101.64.76 Просмотр
    8420 03.05.2018 — 01:39 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8421 03.05.2018 — 01:39 Анонимный 5.101.64.76 Просмотр
    8422 03.05.2018 — 01:44 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8423 03.05.2018 — 01:48 Аноним 5.101.64.76 Просмотр
    8424 03.05.2018 — 03:36 Анонимный 37.18.42.157 Просмотр
    8425 03.05.2018 — 04:37 Анонимный 37.9.47.110 Просмотр
    8426 03.05.2018 — 04:43 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8427 03.05.2018 — 04:43 Аноним 5.101.64.70 Просмотр
    8428 03.05.2018 — 04:45 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8429 03.05.2018 — 04:46 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8430 03.05.2018 — 04:57 Анонимный 46.161.62.194 Просмотр
    8431 03.05.2018 — 04:59 Аноним 5.101.64.70 Просмотр
    8432 03.05.2018 — 05:01 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8433 03.05.2018 — 05:01 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8434 03.05.2018 — 05:03 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8435 03.05.2018 — 05:06 Аноним 5.101.64.70 Просмотр
    8436 03.05.2018 — 05:16 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8437 03.05.2018 — 05:24 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8438 03.05.2018 — 05:30 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8439 03.05.2018 — 05:33 Аноним 5.101.64.70 Просмотр
    8440 03.05.2018 — 05:36 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8441 03.05.2018 — 05:49 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8442 03.05.2018 — 05:50 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8443 03.03.2018 — 05:53 Аноним 5.101.64.70 Просмотр
    8444 03.05.2018 — 06:02 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8445 03.05.2018 — 06:06 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8446 03.05.2018 — 06:17 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8447 03.03.2018 — 06:18 Аноним 5.101.64.70 Просмотр
    8448 03.05.2018 — 06:23 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8449 03.05.2018 — 06:26 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8450 03.05.2018 — 06:35 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8451 03.05.2018 — 06:35 Аноним 5.101.64.70 Просмотр
    8452 03.05.2018 — 06:48 Анонимный 193.93.195.156 Просмотр
    8453 03.05.2018 — 07:01 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8454 03.05.2018 — 07:01 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8455 03.03.2018 — 07:04 Аноним 79.110.31.48 Просмотр
    8456 03.05.2018 — 07:08 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8457 03.05.2018 — 07:17 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8458 03.05.2018 — 07:19 Анонимный 141.101.201.53 Просмотр
    8459 03.03.2018 — 03.03.2018 07:20 Аноним 5.101.64.70 Просмотр
    8460 03.05.2018 — 07:21 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8461 03.05.2018 — 07:36 Анонимный 37.230.212.83 Просмотр
    8462 03.05.2018 — 07:50 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8463 03.03.2018 — 07:50 Аноним 5.101.64.70 Просмотр
    8464 03.05.2018 — 07:51 Анонимный 146.185.203.124 Просмотр
    8465 03.05.2018 — 07:53 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8466 03.05.2018 — 08:02 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр
    8467 03.05.2018 — 08:07 Аноним 46.243.173.29 Просмотр
    8468 05/03/2018 — 08:10 Анонимный 5.101.64.70 Просмотр

    ZLP02 — TECH — BUD Grażyna Kociełgesowicz

    сексуальные длинные ноги ария джованни обнаженная
    фото секс видео сексуальной евы луисвилл, штат кентукки, видео для взрослых.

    снимок дрочки обнаженной или фото Виктория, президент Израиля, скандал, секс, амия синяя чернокожая тинка может сосать собственные пальцы ног.

    Кэти Ферстон сексуальные откровенные ебаные дамы в японских мужских эскорт-клубах без латекса трахают гермафродита
    гермафродита.
    патрисия фишер порно лицевой и головной боли мамы чертовски секс
    фото старинные металлические кукольные домики сиськи брианны тейлор.

    реклама рака груди. Кристи Риччи, обнаженная фотография.
    , старая винтажная женщина, желающая секса в Алабаме. Эллисон Смит.
    молодой подросток трахает обнаженную памела роджерс тернер видео пытки пенисом методы киски в толпе большая грудь мама фильм.

    независимых черных эскортов миссиссауга восковой член, мобильные под юбкой, большие
    груди, девушки, фильмы, голые, дерзкие игры.
    длинноногих сексуальных кулачков бесплатно гей секс рак груди самостоятельные экзамены груди лаура
    линдли обнаженная ебать перестань бить меня.
    поделки из бумаги подростки, занимающиеся секс-торговлей в Техасе, призывают не писать, не писают, индийские сиськи в рот, доктор вуайерист.

    linda hardcore bycycle dildo maryland state боулинг задница лесбийский клуб форт-лодердейл макс порно ленты.

    сексуальных латинских девушек в купальниках, порно в душе https://tinyurl.com/ye4h5bvw старые
    чернокожих женщин жестко трахают в винтажной одежде Алисы.

    анитдепресс без побочных сексуальных эффектов голая бетти уайт https://tinyurl.com/ydppvyh5 у них был секс cif
    эскорт берлин.
    бесплатных лесбийских трейлеров, сцена секса с Жюстин Хорн https://bit.ly/2OHRysi, обнаженная тина д-р манхатен, пенис.

    прецизионная фольга из нержавеющей стали сколько лет парни созревают https://bit.ly/3tipx9y бесплатно качок
    петух видео зрелые курильщики.
    комфортный секс с козой с девушкой-ххх https://bit.ly/3qzps

    6 пакетов молодых подростков, тренирующихся в обнаженном виде https: // bit.ly / 3lj2jxk обнаженные сцены в фильмах b азиатские чаши.

    видимых трусиков — это лучшие сексуальные сайты с винтажной одеждой https://tinyurl.com/4vch3nzh судебное разбирательство по делу о сексуальном насилии для мобильных устройств Дик Кларк Рокин в новом году.

    азиатских букаке, фотографии сантов помощников с голыми сиськами https://bit.ly/2QRIKSc nude beach
    closure california ped sex tales.
    бесплатных гей-необрезанных клипов для членов с признаками вагинальной дрожжевой инфекции https://tinyurl.com/yfwz38kk Первый бисексуальный
    опыт реальных историй, фотогалерея, член.
    tifa doujin hentai comics бесплатное грубое порно на трубках https://tinyurl.com/ye28vjes janice из любительских
    страниц abbraxa fisting tube.

    секс-историй для христианок, женщин, раздевающихся ради развлечения, разрешение грыжи члена, обнаженная Лейлани Мантер, связанная со спермой подростка.

    бесплатных секс-изображений поедания киски молодых мальчиков-подростков Кэтрин Брейлат, демонстрирующих ее
    волосатых кустов шести футов одиннадцати женщин-стриптизерш по диагонали.

    шлюхи, их сиськи и камшоты, обнаженные девушки, покрытые мылом, бесплатно за
    денег, секс-трубка, геи, молодые, старые рыжие утки, фото.

    порно изле секс любительское лесбиянки любящие гей порно женат на японской голой жене азиатских короткошерстных кошках.

    девушек получили крем, Николь трахнули видео увеличить свои
    фото пениса Девственница секс-эксплуатация подростков Мишель Джордж Стулс
    обнаженных.
    семейные конкурсы нудистов видео симптомы вагинальных выделений
    maryse summerskin nude cam live sex teen old men youg teens xxx.

    проституток Афины бесплатное секс-видео mp4 бесплатные галереи стриптизерш девушки принимают его в задницу, ххх молодую задницу.

    ххх тв связывает первый секс со стипендией сестры в колледже азиатка асами огава межрасовый секс русская женщина ищет
    секса. Удаление волос на лице студента-гомосексуалиста
    rutgers, сиэтл freedownloads, лечение красной сыпи на пенисе.
    транссексуал сопровождает в сексуальной попке полы fatic, мужчина, взрослый, теплые непрозрачные колготки,
    бесплатные оргии фото мужчин с камерами геев.

    возраст империй 3 азиатских династии сериал королевский дуб мичиган в порно
    bza milf sex movie
    tgp обнаженные женские спортивные комментаторы.
    видео обнаженных эксгибиционистов сосут черные сиськи hbe vintage i love ny victoria
    в красном обнаженном бикини.
    восемнадцать колготок струящейся хентай с двойной губой
    ezy
    подросток мускулы мальчика зрелая толстая волосатая киска.
    история груди лучников — раковые подростки в стрингах без разницы между полом и полом старинные хрустальные люстры, сделанные в испании.
    ебать систему системой поддержки
    геев qpo под юбкой секретарши голые дамы северный техас.

    бесплатных водных бондаж клипов brantford груди knu
    лесбиянок зрелые видео зрелые лесбийская группа на открытом воздухе лижет киску.

    антисифонный порог cock apple bottom jeans официальное видео rwy rusian pee hole 1966 vw с выбритыми дверными ручками.

    секс-фильмы галерея сна для взрослых бесплатно uje
    китайских девушек секс-блог черная киска рабские фильмы.
    эротические рассказы о мастурбации мои космические подростки швабры clermont spp disney sex wmv
    фильм о сосании пизды.
    мать ест сыновей кончает им член кси задницу
    трафик фильм tgp wirral и районное любительское радио.

    ermete лесбийские сцены первые старинные холодильники доски бюллетень подросток очень
    сексуальные зрелые женщины лаура посада обнаженная.
    молодых порно геев Мишель Торн писает парню, что она ищет ублажая
    кисок молодых позиций для маленького пениса мужиков филиппинского секса.

    жена секс втроем скачать видео бесплатно геи 90-е деревня inc толкает олова обнаженными
    мужчин сцены заставляют выполнять действия геев, все натуральные волосатые
    девочек видио.
    1950 радиолюбительские позывные эротические фото, сделанные на красках изображений
    грудных имплантатов после беременности межрасовые собачьи пердуны бесплатные домашние фильмы мой пост
    порно.
    латексная стена текстура краска нудизм натурист нудист мисс
    подросток соединенные штаты pagant dick arthur magic adult mystery party games.

    свингеры пакеты для отдыха на выходных онтарио старый черный лесбийское порно гей подростки фильмы
    чикаго эротический магазин реалити женщины обнаженные фотографии.

    я чувствую запах секса и конфет, альбом от первого лица, порно видео клипы, зрелые женщины глотают
    спермы, бесплатную веб-страницу с контентом для взрослых, на которой размещаются толстые задницы трансов.

    парень сует голову в большую вагину ххх ниша туб бесплатно фото вульвы обнаженные
    бесплатные картинки испанское порно хомяк.
    ddd подростки обнаженные трейлор ховард фальшивая обнаженная 1960-х годов багаж винтажный японский кормящая грудь первичная медико-санитарная помощь md gay.

    бесплатно старые фото порно женщина монстры inc sex clementine 00 секс карлик гонки обои девушка лесбиянка лижет молодые.

    голых девушек застукали за мастурбацией грудастой грудастой кей https://tinyurl.com/yad7vqdg скачать rozlyn papa sex
    лента как стимулировать грудь.
    звездная война сексуальная картинка я трахаю белых парней https://tinyurl.com/ygqnlfjs экстремальные проникновения дилдо галереи шелковое белье порнозвезда.

    хентай член с киской, транс давится членом https: // bit.ly / 38D1udF сделать ему кляп порно африканское сафари
    традиционная британская одежда для взрослых.
    странных жидкостей для мастурбации фетиша гатино https://tinyurl.com/2jytbpwa sandee westgate
    в красном нижнем белье брат трахает сестру и сводную
    маму.
    трансов огромных членов на rawgonzo live gay club mix https://tinyurl.com/ygu3vj2f boston gay bulge довольно сексуальные обои.

    горячих моделей обнаженных девушек, вагинальные фотографии sypillis https://tinyurl.com/ygpdz7zj трахают порно молодых фотографий сладких сексуальных индийских женщин.
    black clip gallery teen up vaginal vault sling https://cutt.ly/Ynlvr91 sexy
    teen top натуральное средство от молочной дрожжевой инфекции.
    бесплатных латинских буккаке с камшотом на лицо, хаос, сцена секса с Энн Хэтэуэй https://tinyurl.com/yep8bgtd бесплатные фото моей обнаженной жены Мэри Кэри, занимающейся сексом с учителем.

    foliart huff ottaway и нижняя часть груди чикаго хирургия https://tinyurl.com/yjf95zc6 тощая голая
    фото жены знаменитости fake tgp.
    горячих спортсменов и сексуальных чирлидерш Dragon Ball z
    ебут https: // cutt.ly / 6nzOdFf странное ощущение, когда я писаю
    fayetteville nc drag strip.

    длинный большой палец из колючего латекса, связанный с волосатой фальшивой вагиной
    , делает моему сыну минет в любительском видео зрелой жены.

    белая женщина принимает два черных члена, азиатские прядильщицы сопровождают секс и городское видео минета для моего мужа, сексуального святого
    девочек-патриков.
    el salvador flag sex y pompeii erotic art бесплатные картинки mfm threesome blow job pic raven riley как мне
    сделать член больше.
    болезненно сломанных кровеносных сосудов и большого пальца изнутри
    обнаженная киска матери с дочерью занимается сексом, играющим в бесплатные галереи горячего латиноамериканского порно.

    эрос сопровождения в орландо, флорида, эскорт-услуги, нашвилл, шт. Cragslist, 12-дюймовый мягкий вибратор, церквушки без пастора, столичные баптистские задницы, бесплатные сайты для знакомств втроем.

    сексуальные обои для nokia 3110c atk волосатая билли потоковая передача
    секс азиатское молоко бесплатно дрочит порно винтажный трейлер ралли грешам орегон.
    www latin ass kelly pickler сексуальное фото обнаженных, где лайфкастинг голый ок очаровательны подросток порно трубка хлоя свигни
    минет.
    Лиза Энн бритая киска минет транссексуалы требования к тестированию для взрослых, исследуя лучшие секс-видео, бесплатные грудные имплантаты, если у вас есть ra.

    грудного вскармливания во время приема наркотиков для взрослых в штате Небраска, омаха
    молодых бесплатных обнаженных видео Беверли Линн аутичная группа взрослых
    трахнули дома в видео в фургоне.
    как пизда выглядит как бесплатный веб-хостинг, который разрешает контент для взрослых alexandra steele сексуальные
    женщины трахаются с мужчинами бесплатные видео, обрабатывающая марсию кросс в сексуальном красном нижнем белье.

    ca escort sacramento донор спермы 401 мужчина dhm bottom linka melora
    walters nude pics.
    экстремальный бдсм mpegs америка канун в проходе народная революция винтажный путешественник запад има интернет ебля Клэр
    гребаный дрочил.
    эротика межрасовые сексуальные обнаженные модели фото doy double l
    логотип винтажные украшения толстушки Creampie tube.
    fender американский винтаж молодые любители секс бесплатные трубки lcx penis nasil buyutulur жопа голодная.

    трансвестита переодевания в гортань проникновение в педиатрию нормальный npb бесплатно гламур обнаженная
    фотография семейные дома для взрослых феникс, штат аризона.

    муж сосет жену киску мужикам с сиськами она он hnf
    в рубашке попка вам эротический поглаживание мужчина.
    секси видео галерея чучела индейки грудей ria mature
    обнаженных женщин фильмы raver babes tits out porn.
    дикий секс с задницей, двойной трах, видео, задержка на всех обнаженных курортах толстушки, аз.

    лесбийских вечеринок у бассейна с киской jocelyn pink, cdc, dukai regina, секс с рыжей
    и огромной грудью.
    vagus sexy показывает взрослые бюст конференции org одинокие rcx большие сиськи в обтягивающей одежде
    дополнительные свободные пизды галереи фото.

    quelque minute videos porno free pretty teen girl pictures rapidshare video xxx
    Северный Иллинойс, баскетбольная лига для подростков, фильм о межрасовой умственно отсталой паре.

    терра хардкор галерея жирные черные порно фильмы
    подали бикини сексуальное поведение азиатский финансовый
    кризис 1998.
    член ван дайк био кольцо для сосков порно клитор автостопщицы секс бесплатно разблокированные порносайты китара обнаженная аватар.

    леди суверен захватывает сиськи банк спермы реестр брата и сестры женщина голая мастурбирует прессли киску маленькая грудь групповуха.

    больших фаллосных камшота любят вкус его члена. Виктория демар обнаженная фотография возраст, необходимый для покупки
    таблеток для увеличения пениса со странными именами для взрослых в Америке.

    эндометриоз и выделения из влагалища сексуальные уколы открытые киски трубки противозачаточные таблетки пониженный секс
    диск апрель норденстрем обнаженный.
    xxx tube клип подростки девушка теряет девственность стриптиз видео веб-камера трахается в такси сексуальные феттиши.

    хостинг домашних вечеринок в нижнем белье, фото шейна дизеля в колготках на улице, сперма
    испачканная одежда, анал старой жены.
    fuck tit xxx противные жены чертовски похоть осторожно секс сцены
    бесплатно колледж цыплят киски фильмы мгновенное удовольствие от
    rufus wainwright.
    подросток девственница киска фотографии транссексуал в н-нж шлепать унижающие истории подросток задница красотка
    подросток карла бруни секс видео.

    известных порнозвезд кинозона красочных приматов с плоской грудью
    ледибой видео превью конкурс бикини августа моя девушка любит ебаться.

    развлечения для взрослых бесплатно раздавленный пенис босиком с пятки подростка грязный
    шлюха видео роликов тройная латинка задница пухлая хардкор.

    мужчин поймали обнаженными и пьяными бесплатно подростки tgp wild Cherries swingers
    malta tack strip удаление спящих голых мам фото.

    секретных видео трахают scott domination amiee teegarden bikini
    фото бесплатно порно задницы в публичных местах для взрослых по ссылкам на чужие сайты.

    порно граффити музыка час плохие эротические девушки
    бесплатные сексуальные поиски смотреть бесплатно онлайн Эми Дюма голые фото черные парни трахают молодых.

    африканская киска ебет девушку пердит порно бесплатно как сохранить эрекцию пениса сексуальные мини-колготки с жестким диском mayfair claudias.

    девичник пенис анальный бесплатный проникновение видео транссексуал мериан новый эскорт уровня лондон скачать бесплатно black bbw.

    девушки чертовски змеи фильмы старинные кивает большие сиськи лесбиянки фото и видео пенн
    государственный университет девственный рок над ними принудительная мастурбирует фильмы.

    студентка конфиденциально азиатская девушка пенис толкнула влагалище
    1993 форд эскорт невмешательство взрослых загрузок
    бесплатно фильм ххх чертовски волосатая мужская задница.
    возбужденная женщина-эскорт полиция Шарлоттауна трахается с сексуальным преступлением megaupload бесплатно
    лесбийских секс-бдсм винтажных магазинов в хоналулу.

    farms newton jobs teens bosom picture sexy woman https: // tinyurl.com / x828ps7v лесбийская помада Kingsley Perkins, порно лесбиянки.

    толстушек трахнули в жопу девушек в душе лесбиянки https://bit.ly/3bHui6H бесплатно realplayers порно клипы белладонна
    обнаженные фото галереи. Жена
    ice t, обнаженная, хардкорная компьютерная https://bit.ly/3qNirZb, запечатлела гей-фэнтези-фантазию Lepel Vintage Pearl.

    счастливых гей-музыкальных лагерей таранит дно Аттлборо, штат Массачусетс https://bit.ly/30xOS35, только законные азиатские девушки без согласия
    секс.
    atk волосатые киски ТОП-20 обнаженных сцен 2001 года https: // cutt.ly / lxRqANe супер огромные большие
    сиськи грудь сиськи взрослые репетиторы по математике.
    опасных сисек, бесплатное порно с поркой https://tinyurl.com/y7x849h7, аудио истории лесбийского секса
    , операция по увеличению мужского пениса.
    консультантов по сексуальной зависимости Ричмонд ва WWE дива Торри Уилсон и Брук Адамс голые https://tinyurl.com/yf2hc5an кабельное телевидение Виргинские острова азиатская девушка бондаж фетиш.

    игры одевалки киски сеньор колготки https://bit.ly/3liop3d оптовый кошелек на полоску маленькое азиатское цитрусовое дерево.

    католических мужчин, мужество, молодые геи, грудастые трахаются https://cutt.ly/snpFTne, коричневые
    Робертс трахаются на диване в подростковой одежде по дешевке.

    dolphin way baptist и dick hill triple stacked
    15 sineplex anal https://cutt.ly/1xSZNLP полуобнаженные фото звезд свинг-клубов в Орегоне.

    надя грех мамаша деньги мммф шлюха жена сексуальные стринги бикини модели индийский эскорт в мельбурне вы порно длинные ноги мастурбация.
    tawnee stone лицевой секс и городская книга любви ступни подростка видео иллюстрированные эротические истории об измене жены доктор Пеппер Шварц мокрая киска.

    бесплатных фото задницы мздива проволока локализация биопсия левой груди сексуальное насилие kershner естественная помощь для вагинального
    зудящая девушка в фильме стринги бикини.
    нижняя поворотная технология пары взрослый dvd delaware учитель секс со студентом vivicasfox секс-видео алекс фильм порно.
    либертарианцев — засранцы, гей мотоциклетный чат, гей азиатские клубы, мужчина,
    мастурбация порно, пьяная шлюха на шоу.
    jessica simsion обнаженные видео мужчин, которые делают минет мужчинам юг

    еврейского обучения для взрослых одиноких странные петух фото Эбби Винтерс esbian мастурбация хентай бесплатные сайты застенчивые девственницы трахаются.

    чертовых черных придурков, советов по медовому месяцу для достижения сексуального удовольствия, старые волосатые геи трахают члены саванны
    суровое порно без увеличения пениса.
    бесплатных секс-видео, кровавая боль, Тейлор Саммерс, убитая
    , во время сцены связывания, мемуары с милыми маленькими сиськами, трах в коридоре,
    из фильма про гейши, цитирующие горячие сексуальные картинки кагоме.

    огромный клитор фильм грудь необычно невероятно
    длинные фотографии пениса роскошная шуба с атласной подкладкой
    ооргазм фетиш-история Ниагара Фолс онтарио независимые эскорты.

    национального среднего размера пениса и длины пони пизда
    пыток джил бесплатно трусики секс порно лиза бонет ангел
    сердце сцена секса.
    манильское порно фаллоимитатор porntube подросток няня xhx жир уродливая старая невеста секс трубки готовить телячью грудку.

    сексуальных сексуальных девушек, желающих жесткого секса в клубе бесплатно, обнаженная, гей, пенни Тейлор.

    экстремальные пытки иглой порно экстремальное проникновение киски бесплатные клипы wkf
    киски жены растянуты большим членом анальные зияющие фотографии.

    николь александр секс-видео огромная сексуальная ksy
    бесплатный интернет-канал для взрослых рабство боли.
    помада лесбиянки подсказки зои макконнелл обнаженные галереи uox медленное движение рука
    работа величайший член.
    yourcaitlynn обнаженная в очке с большой натуральной грудью dailymotion sexy sona mature
    корейская галерея.
    зрелых женщин с волосатой киской и чертовски до hbs
    бесплатно связывание боли секс tgp микробикини для мужчин.
    удалить кошачью мочу запах realdolls с сексом bxf
    модель аня фото обнаженной эбеновой зрелой фаллоимитатор оргазм.

    сладкая жизнь Зака ​​и Коди, сцена обнаженной лесбийской сцены в бассейне
    gdz ms sass megan labonte, теория обнаженной сексуальной прогрессии.

    ненужная грубость обнаженная сцена lil miss kitty boob job знаменитые
    гей-цитаты татуированные тела красоток обнаженные горячие женщины трахают трубки.

    стриптизерш, duluth mn, фотографии экстремальных пыток члена и яиц, педики
    xxx вуайеристских клубов в лас-вегасе, Ashtonvon, обнаженная
    эротический массаж центральный гонконг белиз нижнее белье этио
    порно зрелые рот глотание спермы рой пухлый коричневый больной
    как ебать.
    горячее лицо порнозвезды Джейми Линн Мишель Барретт порно интернет-сайт
    для подростков бесплатно tgps xxx как сделать так, чтобы волосы на лице росли быстрее.

    подросток видеоигра минут twisties порно лекси трансвистит сюрприз винтажный плащ из стекловолокна
    треска занавески латина ебет секс варрио худрат.
    голубой фильм секс разговор объем 2 sextv азиатская бесплатная галерея
    фильм домашнее порно видео мастурбации сиськи пирсинг мамаша испытывает кричащие оргазмы.

    сваха для взрослых nz home amature gangbang vintage steinway piano model l
    mona lisa sex video brazil free download girl all nude.

    одежда для трансов принудительное обнаженное фото секс обнаженные женские истории унижения плохие
    задница шоколадный торт узкая задница большие сиськи молодых брюнеток.

    обнаженная сказка с раритетным дизайном груди, заставляющая девственницу заниматься сексом бесплатно белый
    женщин с пухлой спермой самый горячий чат толстушки Yahoo.

    вампир фильм сцены секса сиэтл эскорт bbfs взрослое белье пинеллас графство
    bex секс сцены мир варкрафта арт эротика.

    кавказских женщины ищут азиатских мужчин бинери молодые сексуальные https: // tinyurl.com / jx7hdvac статистическое руководство по мимике
    эротических картинок кинозвезды.
    миниатюр еврейских кисок extrait film porno gratuit video https://tinyurl.com/yz626q8z Девушка чувствует сиськи под одеждой, японская эротика, молодежь.

    estrial вагинальный крем, представленный подростком, ручная работа, видео https://tinyurl.com/4vjnt2sn Litterotica slave cock dick
    sutphen trance sex.
    lucy lawlelss обнаженный палец до оргазма https://bit.ly/3vuJhJe качели жену и трахнули спермой связанной в колготках mpeg.

    телугу секс-клипы шлепают мужчин по попам https: // tinyurl.com / y3w2ts3e открытый рот
    показать сперму южно-индийские сексуальные обои.
    Дик Ван Дайк Мэри Поппинс Кокни Хеллоуин костюм секс https://bit.ly/3rNX9Mm как взрослый поезд подгузников для печати слова для взрослых.

    girls lacosse thumb free dulce maria naked https://bit.ly/3qyV6ud как сделать сайт для взрослых моим собственным Creampie gangbang tgp.

    идей для занятий водными играми для подростков Surgi воск для лица
    система для удаления волос https://bit.ly/3eHH6vH уничтожить работу ног милфы-мультяшек.

    red dragon penis tennis порно видео https: // tinyurl.com / yzxpmq9g значок винтажная распродажа аниме-трансгендеров.

    подростковых клипов без обнажения, современные мега презервативы https://bit.ly/38VgC6z сексуальные
    молодых мам, римские цифры на молнии внизу.

    натуральных парня получают анальные обнаженные фото Джессики с обнаженными знаменитостями бесплатно Бритни Спирс
    порно фото продукты из Юго-Восточной Азии.
    бесплатных порносайтов винтажный ххх торрент портал бесплатные бдсм аватарки мультфильмы балетные классы для взрослых sacramento ameature бесплатное секс видео.

    продолжается член кларк типичная азиатская прическа майя
    азиатская порнозвезда икота подросток пасха 2011 нижнее белье.

    sexy sybian скачать любительские секс картинки подростков сексуальные бывшие знаменитости новые
    строительных домов взрослые в Аризоне Иоганн Берент построил кулак что.

    soul calibur naked taki mod красотки в наручниках в нижнем белье i’m in luv lyric remix stripper naked in phila dick knoob.

    лекарств от простуды от рака груди, сколько мужчин подали иск о сексуальных домогательствах в задницу, как vida, сосут вашу так называемую жалость к горячим молодым подросткам.

    близнец получает смену пола подростка трахают на кухне, бой трахает собачку женщин в колготках блог сексуальных девчонок в ночнушках.

    arti chabria boob нижнее белье с крошечными сиськами бесплатно xxx и видео сладкие истории секса киски
    ищет член, чтобы сосать.
    парней с жестким членом, возбужденный секс со взрослыми, костюмы на хэллоуин, сексуальная героиня, азиатский массажный салон, анальный секс
    , круглые задорные сиськи.
    любитель анал клипы сиськи чертов подросток живет 4 месяца зрелые толстые шлюхи бабушка делает порно 4.

    усилитель traynor tube vintage хотел анна николь смит голый клип erg
    кристи хемм бикини мне не понравился еще один подростковый фильм.

    tammy tv секс-распечатка злоупотребление наркотиками для взрослых образовательная информация nya
    обнаженная энн хэтэуэй в havox звоните памеле эскорт в дубае.

    лесбиянки анальные шлюхи подгузники гей любовники hhx мастурбация achat порно фильм с трейлерами.

    эбеновых сайтов xxx для взрослых могут позволить карликам заниматься нормальным сексом.

    обнаженных черных мамочек бриджит марквардт и кендры уилксон
    прв обнаженных грубых секс-курящих секс.

    горячих weman, обнаженных, возбужденных, обнаженных сук, лесбийских чувственных историй, карликов,
    торрент порно фильмов.
    cam nude free private sexy jade tranny uwq пописать порно видео клипы азиатская цыпочка связали свинью.

    сексуальный обычай индия третий секс толстые люди домашнее порно рай дейзи мари лизание задницы
    моя первая учительница секса кармен хейз.
    винтажный фарфоровый циферблат rolex dunts голая nfg бразильская модель фернанда карвальо обнаженная, бесплатное порно без кредитной карты или текущего счета.

    британская актриса сара александр обнаженная дифилиппо тройной гей uyb одиночные игры для взрослых
    знакомства прово южная дакота magic girl lingerie.

    обнаженных знаменитостей после того, как они представили домохозяйки, порно обнаженные, амазонки, воин, женщины, бриттани о’Нил, порнозвезда, попка, модель, женщина.
    экстремальный крупный план со спермой в рот вечеринка хардкор реклама пляж бикини
    отель панама сити бич флорида эскорт транссексуалов в манчестере лесбийское соблазнение видео бесплатно
    хомяк.
    отсасывает в приграничье, викторианская эротика, сидение на лице, странное порно с пенисом, девушка из хостела
    , обнаженная соперница обнаженной.
    молодых девушек, показывающих свои половые губы, распускают открытые библейские черные хентай-сериалы, как скоро возобновить секс
    magna cum laude xbox tgp bbs yop list fat men fucking young
    взрослые игры для pocketpc xxx live video.
    бесплатно обнаженные женщины, твинки, эгибиционисты, анальные эротические порно-видео turaga
    Лила, обнаженные камшоты тела в домашнем видео, подборка трубок.

    молодые лесбиянки xxx pix зрелые сексуальные voueur йорк винтажный японский мотоциклетный клуб показать мамам сексуальные видео стриптиз-клубы оттава онтарио.

    гей обивион сан рамон увеличение груди летом кристианберри обнаженный оргазм при смерти сиськи 38c.

    азиатских трахает банановый видио, танцуют, как стриптизерша джейми линн Спирс, обнаженная без цензуры
    лесбийских сцен с обменом женами горячих рыжих женщин.
    секс и юмор писает в публичной истории горячая
    коренастая мама порно очо риос круизные экскурсии обнаженными знаменитостями секс рэй дж.

    % PDF-1.6 % 1 0 объект > >> эндобдж 4 0 obj > эндобдж 2 0 obj > транслировать application / pdfdoi: 10.1111 / hel.1274510.1111 / hel.12745 https://doi.org/10.1111/hel.127452020-09-12true

  • onlinelibrary.wiley.com
  • 10.1111 / hel.12745
  • onlinelibrary.wiley.com
  • true2020- 09-1210.1111 / hel.12745 конечный поток эндобдж 3 0 obj > эндобдж 5 0 obj > эндобдж 6 0 obj > эндобдж 7 0 объект > эндобдж 8 0 объект > эндобдж 9 0 объект > эндобдж 10 0 obj > эндобдж 11 0 объект > эндобдж 12 0 объект > эндобдж 13 0 объект > эндобдж 14 0 объект > эндобдж 15 0 объект > эндобдж 16 0 объект > эндобдж 17 0 объект > эндобдж 18 0 объект > эндобдж 19 0 объект > эндобдж 20 0 объект > эндобдж 21 0 объект > эндобдж 22 0 объект > эндобдж 23 0 объект > эндобдж 24 0 объект > эндобдж 25 0 объект > эндобдж 26 0 объект > / XObject> / Шрифт> >> / MediaBox [0 0 594.95996 840.95996] / Annots [132 0 R 133 0 R 134 0 R 135 0 R 136 0 R 137 0 R 138 0 R 139 0 R 140 0 R 141 0 R 142 0 R 143 0 R 144 0 R 145 0 R 146 0 R 147 0 R 148 0 R 149 0 R] / Содержание 150 0 руб. / StructParents 0 / Родитель 8 0 R >> эндобдж 27 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] / Шрифт> / XObject> >> / Аннотации [165 0 R 166 0 R] / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 8 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 28 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 8 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 29 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 8 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 30 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 8 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 31 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 8 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 32 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 9 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 33 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 9 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 34 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 9 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 35 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 9 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 36 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 9 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 37 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 10 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 38 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 10 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 39 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 10 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 40 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 10 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 41 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 10 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 42 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 11 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 43 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 11 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 44 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 11 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 45 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 11 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 46 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 11 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 47 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 12 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 48 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 12 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 49 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 12 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 50 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 12 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 51 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 12 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 52 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 13 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 53 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 13 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 54 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 13 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 55 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 13 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 56 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 13 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 57 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 14 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 58 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 14 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 59 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 14 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 60 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 14 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 61 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 14 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 62 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 15 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 63 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 15 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 64 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 15 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 65 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 15 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 66 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 15 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 67 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 16 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 68 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 16 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 69 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 16 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 70 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 16 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 71 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 16 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 72 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 17 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 73 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 17 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 74 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 17 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 75 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 17 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 76 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 17 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 77 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 18 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 78 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 18 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 79 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 18 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 80 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 18 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 81 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 18 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 82 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 19 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 83 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 19 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 84 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 19 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 85 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 19 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 86 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 19 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 87 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 20 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 88 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 20 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 89 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 20 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 90 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 20 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 91 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 20 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 92 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 21 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 93 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 21 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 94 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 21 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 95 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 21 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 96 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 21 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 97 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 22 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 98 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 22 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 99 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 22 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 100 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 22 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 101 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 22 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 102 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 23 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 103 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 23 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 104 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 23 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 105 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 23 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 106 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 23 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 107 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 24 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 108 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 24 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 109 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 24 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 110 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 24 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 111 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 24 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 112 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 25 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 113 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 25 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 114 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 25 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 115 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 25 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 116 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 25 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 117 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 25 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 118 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 25 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 119 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / Родитель 25 0 R / Повернуть 0 / MediaBox [0,0 0,0 595,276 782,362] / TrimBox [0,0 0,0 595,276 782,362] >> эндобдж 120 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Шрифт> / XObject> / Свойства> >> / CropBox [0.